Akut Epitel Herpes Ex Vivo Organotipik Kornea Model Virüs Tip I Enfeksiyon Simplex
Summary
Bu video yazıda yeni bir kullanımı tarif<em> Ex vivo</emAkut herpes> modeli virüsü tip I kornea epitel enfeksiyon simpleks.
Abstract
Herpes keratit, herpes simpleks virüsü tip-1 (HSV-1) ile ilişkili en ciddi patolojilerde biridir. Herpes keratit anda gelişmiş ülkelerde hem kornea kaynaklı ve infeksiyona bağlı körlüğün en önde gelen nedenidir. Herpes keratit Tipik tanıtımı, yara izi gibi kalıcı kornea patolojileri yol açan incelme ve opaklık 1, kornea epitel enfeksiyon ve bazen derin korneal stroma ve endotel içerir.
Kornea HSV-1 enfeksiyonu geleneksel deneysel modellerin iki tipte incelenir. Kornea epitel hücrelerinin kültürlü monolayers bir Petri kabındaki enfekte olduğu in vitro modelin de basitlik, tekrarlanabilirliği yüksek düzeyde, hızlı deneyler ve göreceli olarak düşük maliyeti sunmaktadır. Diğer taraftan, böyle bir tavşan veya fare gibi hayvanlarda kornea direkt olarak inoküle edildiği bir in vivo modeli, en son derece gelişmiş bir fizyolojik sunmaktadırsistem, ancak daha yüksek maliyetler, uzun deneyler, gerekli hayvan bakımı ve değişkenliği daha büyük bir derecesi vardır.
Bu video yazıda, in vivo modeller in vitro ve hem gücünü birleştiriyor kornea epitel HSV-1 enfeksiyonu yeni bir ex vivo modelde, ayrıntılı bir gösteri sunmak. Ex vivo modelde organotypically kültür içinde muhafaza edilmekte ve HSV-1 ile enfekte olan bozulmamış korneası kullanmaktadır. Ex vivo modelinin kullanımı çok fizyolojik açıdan dayalı sonuçlar sağlar, yine de oldukça pahalı değildir ve in vitro model ile karşılaştırılabilir zaman kararlılık gerektirir.
Protocol
Discussion
Bu video yazıda bir ex vivo modelde akut kornea epitel HSV-1 enfeksiyonu çalışmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu hücre kültürü sonuçlarının fizyolojik-doğru doğrulama için izin verir ve böylece, yapılmalıdır hayvan deneyleri miktarını sınırlar, çünkü bu model, in vivo modeller in vitro ve arasında yararlı bir adım. Buna ek olarak, ex vivo modelde bozulmamış insan kornea epitel herpes enfeksiyonu incelemek için eşsiz ve paha biçilmez …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Delaware Valley Lions Göz Bankası desteğiyle bu iş için çok değerli idi. ICP8 karşı Birincil fare monoklonal antikoru Dr David Knipe (Harvard Tıp Okulu) bir tür hediye oldu. Biz de yararlı tartışmalar ve uzmanlık için Dr Stephen Jennings (Tıp Drexel Üniversitesi) ve Dr Peter Laibson (Wills Göz Enstitüsü) teşekkür ederim.
Materials
| Reagents/Supplies | Company | Catalogue # |
| Minimum Essential Medium (MEM) | Mediatech | 10-010-CV |
| Non-Essential Amino Acids (100x solution) | Mediatech | 25-025-CI |
| L-Glutamine | Mediatech | 25-005-CI |
| Penicillin G Sodium Salt | Sigma | P3032 |
| Streptomycin Sulfate Salt | Sigma | S9137 |
| Agarose | Invitrogen | 15510-027 |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Prepared in lab | N/A |
| Trypsin EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI |
| DNeasy Blood & Tissue Kit | QIAGEN | 69504 |
| RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 |
| Laemmli Buffer | Prepared in lab | N/A |
| Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound | Tissue-Tek | 4583 |
| Whole Rabbit Eyes (Young) | Pel-Freez | 41211-2 |
| Human Corneas and Whole Eyes | Local Eye Bank | N/A |
| 12 Well Porcelain Spot Plate | Avogadro’s Lab Supply | 1877 |
| 35 mm Tissue Culture Dish | Falcon | 353001 |
| 6 Well Cell Culture Plate | Greiner Bio-One | 657160 |
| Cryomold Intermediate | Tissue-Tek | 4566 |
References
- Kaye, S., Choudhary, A. Herpes simplex keratitis. Prog. Retin. Eye Res. 25, 355-380 (2006).
- Holmberg, B. J. Enucleation of exotic pets. Journal of Exotic Pet Medicine. 16, 88-94 (2007).
- Remeijer, L., Osterhaus, A., Verjans, G. Human herpes simplex virus keratitis: the pathogenesis revisited. Ocul. Immunol. Inflamm. 12, 255-285 (2004).
- Foreman, D. M., Pancholi, S., Jarvis-Evans, J., McLeod, D., Boulton, M. E. A simple organ culture model for assessing the effects of growth factors on corneal re-epithelialization. Exp. Eye Res. 62, 555-564 (1996).
- Xu, K. P., Li, X. F., Yu, F. S. Corneal organ culture model for assessing epithelial responses to surfactants. Toxicol. Sci. 58, 306-314 (2000).
- Klausner, E. A., Peer, D., Chapman, R. L., Multack, R. F., Andurkar, S. V. Corneal gene therapy. J. Control Release. 124, 107-133 (2007).
- Halford, W. P. ICP0 antagonizes Stat 1-dependent repression of herpes simplex virus: implications for the regulation of viral latency. Virol. J. 3, 44 (2006).
- Bhattacharjee, P. S. Effective treatment of ocular HSK with a human apolipoprotein E mimetic peptide in a mouse eye model. Invest Ophthalmol Vis. Sci. 49, 4263-4268 (2008).
- Novitskaya, E. S. Difficulties imaging herpes simplex keratitis with fluorescein isothiocynate-labeled anti-HSV-1 antibodies in an ex vivo model. Cornea. 28, 421-425 (2009).
- Sharma, A., Shimeld, C. In vivo immunofluorescence to diagnose herpes simplex virus keratitis in mice. Br. J. Ophthalmol. 81, 785-788 (1997).
