En este artículo de vídeo se describe el uso de un nuevo<em> Ex vivo</em> Modelo de herpes simplex virus tipo agudas que la infección del epitelio corneal.
La queratitis herpética es una de las patologías más graves asociadas con el virus del herpes simple de tipo 1 (HSV-1). La queratitis herpética es actualmente la principal causa de ceguera tanto córnea-derivado y las infecciones asociadas-en el mundo desarrollado. Presentación típica de la queratitis por herpes incluye la infección del epitelio corneal y el estroma a veces córnea más profunda y el endotelio, lo que conduce a patologías corneales tales como cicatrices permanentes, adelgazamiento, y la opacidad 1.
Corneal infección HSV-1 es tradicionalmente estudiado en dos tipos de modelos experimentales. El modelo in vitro, en el que las monocapas de cultivo de células epiteliales corneales infectadas en una placa de Petri, ofrece simplicidad, alto nivel de replicabilidad, experimentos rápidos y los costos relativamente bajos. Por otro lado, el modelo in vivo, en el que los animales tales como conejos o ratones se inoculan directamente en la córnea, ofrece una fisiológica altamente sofisticadosistema, pero tiene costos más altos, más largos experimentos, cuidado de animales necesario, y un mayor grado de variabilidad.
En este artículo de vídeo, se proporciona una demostración detallada de un modelo ex vivo de nuevo corneal epitelial infección HSV-1, que combina las ventajas tanto de la vitro y en modelos in vivo en el. El modelo ex vivo utiliza córneas intactas organotypically mantenidas en cultivo e infectadas con HSV-1. El uso del modelo ex vivo permite conclusiones altamente fisiológicamente basadas, sin embargo, es bastante barato y requiere dedicación de tiempo comparable a la del modelo de vitro.
En este artículo de vídeo se describe un método para el estudio agudo corneal epitelial infección HSV-1 en un modelo ex vivo. Este modelo es un escalón útil entre la in vitro y la modelos de vivo, ya que permite la validación fisiológicamente precisa de los resultados de cultivo de células y, por lo tanto, limita la cantidad de experimentación animal que debe ser realizada. Además, el modelo ex vivo ofrece una oportunidad única y valiosa para estudiar la infecció…
The authors have nothing to disclose.
El apoyo del Banco Leonístico de Delaware Valley fue muy valiosa para este trabajo. Anticuerpo monoclonal de ratón contra ICP8 primaria fue una especie de regalo del doctor David Knipe (Harvard Medical School). También agradecemos al Dr. Stephen Jennings (Drexel University College of Medicine) y el Dr. Peter Laibson (Wills Eye Institute) útil para los debates y la experiencia.
Reagents/Supplies | Company | Catalogue # |
Minimum Essential Medium (MEM) | Mediatech | 10-010-CV |
Non-Essential Amino Acids (100x solution) | Mediatech | 25-025-CI |
L-Glutamine | Mediatech | 25-005-CI |
Penicillin G Sodium Salt | Sigma | P3032 |
Streptomycin Sulfate Salt | Sigma | S9137 |
Agarose | Invitrogen | 15510-027 |
Phosphate Buffered Saline (PBS) | Prepared in lab | N/A |
Trypsin EDTA (1x) | Mediatech | 25-053-CI |
DNeasy Blood & Tissue Kit | QIAGEN | 69504 |
RNeasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 |
Laemmli Buffer | Prepared in lab | N/A |
Optimal Cutting Temperature (OCT) Compound | Tissue-Tek | 4583 |
Whole Rabbit Eyes (Young) | Pel-Freez | 41211-2 |
Human Corneas and Whole Eyes | Local Eye Bank | N/A |
12 Well Porcelain Spot Plate | Avogadro’s Lab Supply | 1877 |
35 mm Tissue Culture Dish | Falcon | 353001 |
6 Well Cell Culture Plate | Greiner Bio-One | 657160 |
Cryomold Intermediate | Tissue-Tek | 4566 |