Intraduktive Injektion: Injektionsmix in die Kanäle der Maus-Brustdrüse

1. Intraduktive Injektion

1. Verwenden Sie aseptische Techniken während des gesamten chirurgischen Eingriffs.
2. Machen Sie eine Einschnittstelle auf der Haut mit einer Länge von 1 cm zwischen den beiden vierten Leisten-MGs (Abbildung 1). Trennen Sie die Hautklappe (mit dem MG) vorsichtig vom parietalen Peritoneum, um den brustduktalen Baum zu visualisieren.
3. Halten Sie die Brustwarze vorsichtig mit der Zange des Uhrmachers fest und entfernen Sie die Außennippel, ohne die hautnahe Haut mit einer Mikro-Sektionsschere zu schneiden.
4. Mit einer 33 G-Metallnabennadel in eine 25-L-Hamilton-Spritze mit 33 G-Metallnabennadel. Schätzen Sie das Volumen der Injektionsmischung in der Spritze auf der Grundlage des in der Mischung enthaltenen blauen Farbstoffs.
   HINWEIS: Verwenden Sie ein kleineres Volumen (z. B. 3 l) bei der Injektion in MGs von 3–4 Wochen alten Weibchen und ein größeres Volumen (z. B. 10 l) bei der Injektion in MGs von laktierenden Weibchen.
5. Halten Sie vorsichtig den Rand der Hautklappe mit einer feinen gekrümmten Pinzette und injizieren Sie die Ad-Cre Injektionsmischung langsam in die Brustwarze, während sie die Ausbreitung von blauem Farbstoff in den Brustduktalbaum überwacht. Halten Sie die Injektionsrate so niedrig wie möglich, um Schäden am duktalen Lumen zu vermeiden.
   HINWEIS: Die Injizierte Flüssigkeit (wie durch den mitgelieferten Bromphenolblaufarbstoff veranschaulicht), die sich über den gesamten duktalen Baum ausbreitet, ohne in das stromale Fach zu gelangen, deutet auf eine erfolgreiche intraduktive Injektion hin.
6. Ziehen Sie die Nadel vorsichtig aus der Brustwarze, um ein Auslaufen der injizierten Flüssigkeit zu vermeiden.
7. Untersuchen Sie die distale Seite (d. h. weg von der Brustwarze) des MG oder die Umgebung der injizierten Brustwarze. Beachten Sie, dass anschwellender blauer Farbstoff (d. h. Farbstoff, der in das nahe gelegene Stroma diffundiert) eher auf eine Brustfettpad-Injektion als auf eine erfolgreiche intrauktale Injektion hinweist.
8. Schließen Sie die chirurgischen Wunden (ab 1.2) in der Haut mit Wundclips.

2. Postoperative Pflege

1. Entfernen Sie die Maus von der Anästhesie und legen Sie sie auf ein Heizkissen in einem sauberen Käfig für die Erholung.
2. Meloxicam subkutan bei 5 mg/kg wieder verabreichen, 24 h nach der Operation.
3. Überwachen Sie die allgemeinen Bedingungen des Tieres und suchen Sie 5 Tage lang nach Anzeichen einer Infektion an der Einschnittstelle.
4. Wundclips werden 7-10 Tage nach der Operation entfernt.

Abbildung 1: Schematische darstellung der intraduktiven Injektion des Ad-Cre-Virus in ein MG. (A) Einschnittstelle in der Mittellinie zwischen den beiden vierten MGs. (B) Intraduktive Injektion von Ad-Cre mit einem blauen Farbstoff (für eine bessere Visualisierung) in eines der vierten MGs. (C) Schließen des Einschnitts in der Haut durch Wundclips