Injeção intraducional: Entregando mistura de injeção nos dutos da glândula mamária do rato

1. Injeção intraducional

1. Use técnicas assépticas durante todo o procedimento cirúrgico.
2. Faça um local de incisão na pele com um comprimento de ~1 cm entre os dois quartos MGs inguinais(Figura 1). Separe cuidadosamente a aba da pele (com a MG) do peritônio parietal de modo a visualizar a árvore ductal mamária.
3. Segure cuidadosamente o mamilo com fórceps do Relojoeiro e remova o mamilo exterior sem cortar nenhuma pele próxima, usando uma tesoura de micro-dissecção.
4. Carregue ~3-5 μL de mistura de injeção Ad-Cre em uma seringa Hamilton de 25 μL com uma agulha de hub metálico de 33 G afixada. Estime o volume da mistura de injeção na seringa à base do corante azul incluído na mistura.
   NOTA: Use um volume menor (por exemplo, 3 μL) ao injetar em MGs de fêmeas de 3 a 4 semanas de idade e um volume maior (por exemplo, 10 μL) ao injetar em MGs de fêmeas lactantes.
5. Segure suavemente a borda da aba da pele com uma pinça curva fina e injete a mistura de injeção Ad-Cre lentamente no mamilo, enquanto isso monitorando a propagação de corante azul na árvore ductal mamária. Mantenha a taxa de injeção o mais baixa possível para evitar danos ao lúmen ductal.
   NOTA: O fluido injetado (como ilustrado pelo corante azul bromofenol incluído) espalhando-se por toda a árvore ductal sem vazar para o compartimento estromal indica uma injeção intradutal bem sucedida.
6. Retire suavemente a agulha do mamilo para evitar qualquer vazamento do fluido injetado.
7. Examine o lado distal (ou seja, longe do mamilo) da MG ou da área circundante do mamilo injetado. Note que o inchaço do corante azul (ou seja, diluição de corante no estroma próximo) indica uma injeção de almofada de gordura mamária em vez de uma injeção intradutal bem sucedida.
8. Feche as feridas cirúrgicas (de 1,2) na pele com clipes de ferida.

2. Cuidados pós-operatórios

1. Retire o rato da anestesia e coloque-o em uma almofada de aquecimento dentro de uma gaiola limpa para recuperação.
2. Administre meloxicam subcutâneamente a 5 mg/kg novamente, 24 horas após a cirurgia.
3. Monitore as condições gerais do animal e procure sinais de infecção no local da incisão por 5 dias.
4. Os clipes da ferida são removidos ~7-10 dias após a cirurgia.

Figura 1: Diagrama esquemático da injeção intradutal do vírus Ad-Cre em mg. (A) Local de incisão na linha média entre os dois quartos MGs. (B) Injeção intradutal de Ad-Cre com um corante azul (para melhor visualização) em um dos quartos MGs. (C) Fechamento da incisão na pele por clipes de ferida