Intraduktal injektion: Leverera injektionsblandning i kanalerna i musens bröstkörtel

1. Intraduktiv injektion

1. Använd aseptiska tekniker under hela det kirurgiska ingreppet.
2. Gör ett snitt på huden med en längd av ~1 cm mellan de två fjärde inguinala MGs (Figur 1). Separera försiktigt hudluckan (med MG) från parietalperitoneum för att visualisera bröstduktträdet.
3. Håll försiktigt bröstvårtan med Urmakarens tång och ta bort den yttre bröstvårtan utan att skära någon närliggande hud med hjälp av en mikrodesektionssax.
4. Ladda ~3–5 μL Ad-Cre-injektionsblandning i en 25 μL Hamilton-spruta med en 33 G metallnavnål fäst. Uppskatta volymen av injektionsblandningen i sprutan baserat på det blå färgämnet som ingår i blandningen.
   OBS: Använd en mindre volym (t.ex. 3 μL) när du injicerar i MGs av 3-4 veckor gamla honor och en större volym (t.ex. 10 μL) när du injicerar i MGs av ammande honor.
5. Håll försiktigt kanten på hudluckan med en fin böjd pincett och injicera ad cre-injektionsblandningen långsamt i bröstvårtan, samtidigt som du övervakar spridningen av blått färgämne i bröstduktträdet. Håll injektionshastigheten så låg som möjligt för att undvika skador på duktallumen.
   OBS: Injicerad vätska (som illustreras av den medföljande bromophenol blå färgämne) sprider sig genom hela duktal trädet utan läcka in i stromal kupé indikerar en framgångsrik intraduktal injektion.
6. Dra försiktigt ut nålen ur bröstvårtan för att undvika läckage av den injicerade vätskan.
7. Undersök mg:ns distala sida (dvs. bort från bröstvårtan) eller det omgivande området på den injicerade bröstvårtan. Observera att svullnad blå färgämne (dvs färgämne som sprider sig till den närliggande stroma) indikerar en bröstfett pad injektion snarare än en framgångsrik intraduktal injektion.
8. Stäng operationssåren (från 1,2) i huden med sårklämmor.

2. Postoperativ vård

1. Ta bort musen från anestesin och placera den på en värmeplatta inuti en ren bur för återhämtning.
2. Administrera meloxicam subkutant vid 5 mg/kg igen, 24 timmar efter operationen.
3. Övervaka djurets allmänna tillstånd och leta efter tecken på infektion vid snittplatsen i 5 dagar.
4. Sårklämmor avlägsnas ~ 7-10 dagar efter operationen.

Figur 1: Schematiskt diagram över intraduktal injektion av Ad-Cre-virus i en MG. a)Snittställe i mittlinjen mellan de två fjärde MGs. (B) Intraduktal injektion av Ad-Cre med ett blått färgämne (för bättre visualisering) till en av de fjärde MGs. (C) Stängning av snittet i huden genom sårklämmor