Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Eine intrauktive Injektion ist eine Technik der Bereitstellung einer Injektionsmischung, die Krebszellen, Expressionsvektoren oder ein therapeutisches Mittel enthalten kann, das mit einem Tracerfarbstoff in Kanäle der Brustdrüse ergänzt wird.
Laden Sie für dieses Verfahren eine Spritze mit der Injektionsmischung. Als nächstes legen Sie eine anästhesierte Maus-Ventralseite auf ein chirurgisches Bett. Machen Sie einen Schnitt auf der Haut zwischen der Leisten- oder fünften Paar Brustdrüsen. Trennen Sie vorsichtig die Hautklappe vom parietalen Peritoneum, um den duktalen Baum zu visualisieren.
Heben Sie mit Zangen die Brustwarze an und schneiden Sie vorsichtig ihr äußeres Teil, um die Kanalöffnung zu sehen. Verwenden Sie eine Pinzette, um die Kante der Hautklappe zu heben, und legen Sie die Spritzennadel vorsichtig in die Brustwarze ein, um die Injektionsmischung zu liefern. Überwachen Sie die Bewegung des Tracerfarbstoffs in den Brustduktalbaum. Der Farbstoff breitet sich im duktalen Baum aus, ohne in den Stroma zu gelangen, was auf eine erfolgreiche Injektion hindeutet.
Warten Sie einige Sekunden, um Verschüttungen zu vermeiden, und entfernen Sie dann langsam die Nadel von der Injektionsstelle. Schließen Sie den Schnitt mit dem Wundclip. Im folgenden Protokoll führen wir eine intraduktive Injektion durch, um Cre-expressing adenovirus in die Maus-Brustdrüse zu liefern.
Verwenden Sie aseptische Techniken während des gesamten chirurgischen Eingriffs. Machen Sie eine Einschnittstelle auf der Haut mit einer Länge von etwa einem Zentimeter zwischen den beiden vierten Leistenbrustdrüsen. Trennen Sie vorsichtig die Hautklappe vom parietalen Peritoneum, um den Brustduktalbaum zu visualisieren.
Halten Sie die Brustwarze vorsichtig mit Uhrmacherzangen, um die Außennippel zu entfernen, ohne die nahe gelegene Haut mit einer Mikro-Sektionsschere zu schneiden. Laden Sie etwa drei bis fünf Mikroliter Cre Adenovirus Injektionsmischung in eine 25 Mikroliter Hamilton Spritze mit einer 33 Gauge Metallnabennadel befestigt.
Schätzen Sie das Volumen der Injektionsmischung in der Spritze auf der Grundlage des in der Mischung enthaltenen blauen Farbstoffs. Halten Sie vorsichtig den Rand der Hautklappe mit einer feinen gekrümmten Pinzette und injizieren Sie die Cre adenovirus Injektionsmischung langsam in die Brustwarze, während Sie die Ausbreitung von blauem Farbstoff in den Brustduktalbaum überwachen. Halten Sie die Injektionsrate so langsam wie möglich, um Schäden am duktalen Lumen zu vermeiden.
Eine erfolgreiche intrauktale Injektion wird durch injizierte Flüssigkeiten angezeigt, die sich über den gesamten duktalen Baum ausbreiten, ohne in das Stromfach zu gelangen. Ziehen Sie die Nadel vorsichtig aus der Brustwarze, um ein Auslaufen der injizierten Flüssigkeit zu vermeiden. Untersuchen Sie die distale Seite der Brustdrüse oder die Umgebung der injizierten Brustwarze.
Farbstoff, der in die nahe gelegene Stroma diffundiert, wie hier gezeigt, deutet eher auf eine Brustfettpad-Injektion als auf eine erfolgreiche intrauktale Injektion hin. Schließen Sie die chirurgischen Wunden und die Haut mit Wundclips.
Entfernen Sie die Maus von der Anästhesie und legen Sie sie auf ein Heizkissen in einem sauberen Käfig für die Erholung. Überwachen Sie die Entwicklung des Brusttumors, wie im Textprotokoll beschrieben.
