Ablazione epatica mirata: indurre la morte degli epatociti con metronidazolo nelle larve transgeniche di zebrafish
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Choi T.Y., et al. Ablazione specifica degli epatociti nel pesce zebra per studiare la rigenerazione epatica guidata dalla biliare. J. Vis. Exp. (2015)
L’articolo descrive l’ablazione mirata del fegato, un metodo per indurre la morte degli epatociti con metronidazolo nelle larve transgeniche di zebrafish. Il protocollo di esempio descrive il processo per generare, manipolare e valutare l’ablazione mirata del fegato nei pesci zebra.
Protocol
1. Preparazione di embrioni/larve Trasferire 100 embrioni in una piastra di petri da 100 mm con 25 ml di acqua d’uovo. Conservare non più di 100 embrioni per piastra di Petri e sollevarli a 28 °C. Per inibire la pigmentazione, aggiungere la feniltiourea (PTU) nelle piastre di Petri prima della post-fecondazione di 10 ore (HPF) e sollevare embrioni / larve fino a 80 hpf. La concentrazione finale di PTU è di 0,2 mM.ATTENZIONE: La PTU è tossica. Utilizzare in conformità con le l…
Materials
| 3-amino benzoic acid ethyl ester (Tricaine) powder | Sigma-Aldrich | A5040 | Make 0.4% (15 mM) tricaine stock : Bring 0.4 g tricaine to 100 mL with egg water. Adjust to pH 7. |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | |
| Metronidazole | Sigma-Aldrich | M1547 | |
| N-Phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich | P7629 | |
| 100 x 15 mm petri dish | Denville Scientific Inc. | M5300 | |
| egg water | 0.3 g/L of sea salts ‘Instant Ocean’ and 0.5 mM CaSO4 in distilled water. | ||
| epifluorescence microscope | Leica Microsystems | M205FA |
Citar este artículo
Targeted Liver Ablation: Inducing Hepatocyte Death with Metronidazole in Transgenic Zebrafish Larvae. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20181, doi: (2023).