Sözlü İletim<em> Listeria monocytogenes</em> Kirlenmiş Gıda Yutma ile Farelerde
Summary
Bu kağıt kullanılarak farenin oral enfeksiyonu için yeni bir yöntemi anlatmaktadır<em> Listeria monocytogenes</emGıda>-kontamine. Protokol kolayca diğer gıda kaynaklı bakteriyel patojenler ile kullanım için adapte edilebilir.
Abstract
L. monocytogenes insanlarda gıda kaynaklı enfeksiyonlara neden fakültatif hücre içi bakteriyel patojenler bulunmaktadır. Çok az yakın insan hastalığı taklit eden küçük bir hayvan modelinin eksikliği nedeniyle listeriosis gastrointestinal faz hakkında bilinmektedir. Bu çalışma, L. sözlü iletim için yeni bir fare modeli açıklar monocytogenes. Fareler beslenen L., bu modeli kullanarak monositogenlerinin kirlenmiş ekmek duyarlı (BALB / c / j /) veya dirençli (C57BL / 6) fare suşlarının sistemik yayılmasını değişen derecelerde takip gastrointestinal enfeksiyon gibi ayrı bir faz vardır. Enfeksiyon daha sonraki aşamalarında, safra kesesi ve beyne yayılması görülmektedir. Listeriosis gıda kaynaklı modeli, son derece tekrarlanabilir özel beceri gerektirmez, ve bakteriyel izolatlar ve laboratuvar fare suşlarının geniş bir yelpazede kullanılabilir. Bu nedenle, L. tarafından kullanılan iki virülans stratejileri incelemek için ideal bir model monocytogenes </em> bağırsak kolonizasyonu, hem de invaziv gıda kaynaklı bakteriyel enfeksiyon için ana tepki teşvik etmek.
Introduction
Listeria monocytogenes, insanlarda gıda kaynaklı enfeksiyonlara neden fakültatif hücre içi bakteriyel patojenler bulunmaktadır. Bakteri tuzlama, kurutma gibi olarak gıda tedarik, korumak için kullanılan süreçlerin çok dayanıklı, ya da soğutma 1,2 ve enfeksiyonlar genellikle tüketim önce ısıtılır değildir işlenmiş, "hazır yemek" gıdalar ile bağlantılıdır . L. birkaç önceki salgınları, kaynak monocytogenes-kontamine yiyecek tespit edilmiştir, ve maruz kalan bireylerin kısıtlı grup yakından 3-6 izlenmiştir. Bu örneklerde, aksi takdirde sağlıklı kişilerde klinik hastalık hafif, kendini sınırlayan gastroenterit daha ağır bağırsak ve sistemik enfeksiyonlar gerektiren hastanede. L. çeşitli yenidoğan ve yaşlılar dahil olmak üzere bağışıklık sistemi zayıflamış kişiler, içinde monocytogenes enfeksiyonları bile antibiyotik tedavisi ile, bir yüksek ölüm oranı (% 25-30) ile ilişkilendirilmiştir <s7,8> kadar. Küçük L. için bulaşıcı dozu hakkında bilinen monocytogenes, ya da küçük bir hayvan modeli eksikliği nedeniyle öncelikle sözlü iletim sonra enfeksiyona duyarlılık yöneten ana faktörler, bu enfeksiyon sonuçları özetlediği bu geniş.
Listeryoz En yaygın olarak kullanılan model farenin intravenöz (iv) bir aşı. Iv modeli son derece tekrarlanabilir, ve enfeksiyon 9,10 sırasında naif ve bellek hem de T hücre yanıtları eğitim için son derece yararlı olmuştur. Iv modelinin dezavantajı tamamen enfeksiyon bağırsak faz atlar olmasıdır. Gıda kaynaklı iletim sonra, bağırsak mukoza muhtemelen yavaşlatır ve sürekli çevre dokulara yaymak olabilir bakteri sayısını sınırlayan bir engel oluşturur. Buna karşılık, tüm inokulum iv uygulamadan sonra birkaç dakika içinde dalak, karaciğer ve bulunabilir ve organizmaların bu büyük bolus olarak doğuştan gelen bağışıklık d bastıran olabilirbu dokularda efenses. Yüksek dozlarda (10 9 -10 11 CFU) genellikle bağırsak kolonizasyonu 10 elde etmek için gerekli, çünkü sonda ile farelerin ağız enfeksiyonu daha az yaygın olarak kullanılır. Ayrıca, bir besleme iğnesi ile birlikte intragastrik (Ig) aşılama sistemik yayılmasını önce sindirim sistemi enfeksiyonu tekrarlanabilir bir süre üretmez. Bazı laboratuvarlar bu L. bildirdin diğerleri 48 hpi 11-15 kadar sistemik yayılma gösterdi monocytogenes, 4-12 saat sonrası enfeksiyon (hpi) içinde dalak ve karaciğer ulaşır. Bu laboratuvar-to-laboratuar varyasyon yemek borusu astar minör travmaya neden olabilir hangi, ig inokülasyon invaziv bir sonucu olması ve bakteri doğrudan kan işgali teşvik edebilir.
Biz son zamanlarda sözlü L. yeni bir fare modeli geliştirdi yakın insan hastalığı 16 her aşamasında taklit monocytogenes enfeksiyonu. Fareler devam parçaları yemek zaman enfeksiyon ortaya çıkarGıda, travmatik olmayan bir süreç, aminated ve laboratuvar araştırmacılar tarafından özel beceri gerektirmez. Zaman ayrı bir süre (36-48 saat) için, L. monositogenlerinin tekrarlanabilir böylece bağırsak mukozasındaki transloke ve çevre dokulara yayılması için Listeria patojen tarafından kullanılan mekanizmalarının incelenmesi sağlayan, sadece mide-bağırsak sisteminde koloni. Önemli olarak, model enfeksiyona ana doğal dirençte farklılıklarını incelemek için kullanılabilir. Bir önceki çalışmada, BALB / c / J fareler By / L. üstel çoğaltma ile, gıda kaynaklı listeriozis son derece duyarlı olduğunu gösterdi bağırsak, dalak, karaciğer ve safra kesesi 16 meydana monocytogenes. Bunun aksine, C57BL / 6 fareler L. yalnızca geçici kolonizasyonunu, gıda kaynaklı enfeksiyona karşı dirençli monocytogenes, bu dokuların her meydana gelen. Yakın insan hastalığı taklit gıda kaynaklı modelinin bir diğer özelliği doğal yayılması olduğunubeyin enfeksiyonu sonraki aşamalarında (5-7 dpi) sırasında meydana için.
Protocol
Representative Results
Discussion
Doğuştan fareler günün her zaman beslenme için düzgün açık değildir ve kontamine ekmek yemek için istekli olduklarını hem gerginlik tipi ve farelerin 17 yaşına bağlıdır. Bizim tecrübelerimize göre, 6-9 haftalık B6 fareler günün herhangi bir zamanda besleme için açık olan, ama onların karanlık döngüsü sırasında sunulan sürece BALB fareler sürekli ekmek parçası yemek olmaz. Karanlık evre laboratuvar personeli için normal iş günü denk böylece hayvanların ev için kulla…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma SEFD verilen Ulusal Sağlık Enstitüleri (AI079442 ve AI091918) hibe tarafından desteklenmiştir
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Brain Heart Infusion Agar | Difco | BD-241830 | |
| Lithium chloride | Sigma | L9650 | |
| Glycine | Omnipur | 4840 | |
| EDTA | Gibco | 15575-038 | |
| DTT | Sigma | D5545 | |
| Collagenase, type IV | Worthington | LS004089 | |
| DNAse I | Worthington | LS002007 | |
| Diff-Quik | Dade-Behring | B4132-1A | |
| PowerGen 1000 homogenizer | Fisher | 14-261-06 | |
| stainless steel type 304 mesh #80 | Small Parts, Inc. | CX-0080-C | |
| Cytospin | Statspin | M801-22 |
Referenzen
- Becker, L. A., Evans, S. N., Hutkins, R. W., Benson, A. K. Role of sigmaB in adaptation of Listeria monocytogenes to growth at low temperature. Journal of Bacteriology. 182, 7083-7087 (2000).
- Neunlist, M. R., et al. Effect of salting and cold-smoking on the culturability, viability, and virulence of Listeria monocytogenes strain Scott A. Journal of Food Protection. 68, 85-91 (2005).
- Aureli, P., et al. An outbreak of febrile gastroenteritis associated with corn contaminated by Listeria monocytogenes. N. Engl. J. Med. 342, 1236-1241 (2000).
- Dalton, C. B., et al. An outbreak of gastroenteritis and fever due to Listeria monocytogenes in milk. N. Engl. J. Med. 336, 100-105 (1997).
- Frye, D. M., et al. An outbreak of febrile gastroenteritis associated with delicatessen meat contaminated with Listeria monocytogenes. Clin. Infect. Dis. 35, 943-949 (2002).
- Salamina, G., et al. A foodborne outbreak of gastroenteritis involving Listeria monocytogenes. Epidemiol. Infect. 117, 429-436 (1996).
- Mead, P. S., et al. Food-related illness and death in the United States. Emerging Infectious Diseases. 5, 607-625 (1999).
- Wing, E. J., Gregory, S. H. Listeria monocytogenes: Clinical and experimental update. The Journal of Infectious Disease. 185, S18-S24 (2002).
- Condotta, S. A., Richer, M. J., Badovinac, V. P., Harty, J. T. Probing CD8 T cell responses with Listeria monocytogenes infection. Advances in Immunology. 113, 51-80 (2012).
- Disson, O., et al. Modeling human listeriosis in natural and genetically engineered animals. Nat Protoc. 4, 799-810 (2009).
- Czuprynski, C. J., Faith, N. G., Steinberg, H. A/J mice are susceptible and C57BL/6 mice are resistant to Listeria monocytogenes infection by intragastric inoculation. Infect. Immun. 71, 682-689 (2003).
- Gajendran, N., et al. Regional IFNgamma expression is insufficient for efficacious control of food-borne bacterial pathogens at the gut epithelial barrier. Int. Immunol. 19, 1075-1081 (2007).
- Lecuit, M., et al. A transgenic model for listeriosis: role of internalin in crossing the intestinal barrier. Science. 292, 1722-1725 (2001).
- Pron, B., et al. Comprehensive study of the intestinal stage of listeriosis in a rat ligated ileal loop system. Infect. Immun. 66, 747-755 (1998).
- Wollert, T., et al. Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design. Cell. 129, 891-902 (2007).
- Ghanem, B. o. u., N, E., et al. InlA promotes dissemination of Listeria monocytogenes to the mesenteric lymph nodes during food borne infection of mice. PLoS Pathogens. , (2012).
- Kowal, M., Buda-Lewandowska, D., Plytycz, B., Styrna, J. Day/night food consumption in mice is strain and age-dependent. Folia Biol. (Krakow). 50, 1-3 (2002).
- Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. Listeria monocytogenes – from saprophyte to intracellular pathogen. Nature reviews. Microbiology. 7, 623-628 (2009).
- Camejo, A., et al. The arsenal of virulence factors deployed by Listeria monocytogenes to promote its cell infection cycle. Virulence. 2, 379-394 (2011).
