Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
需要订阅 JoVE 才能查看此 内容. 登录或开始免费试用。
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
İntradüktal enjeksiyon, kanser hücreleri, ekspresyon vektörleri veya meme bezinin kanallarına bir izleyici boyası ile desteklenmiş bir terapötik madde içerebilecek bir enjeksiyon karışımı sağlama tekniğidir.
Bu işlem için enjeksiyon karışımı ile bir şırınna yükleyin. Daha sonra, anestezi edilmiş bir fare ventral tarafını cerrahi bir yatağa yerleştirin. Kasık veya beşinci meme bezleri arasında ciltte bir kesi yapın. Düktal ağacı görselleştirmek için cilt kapağını parietal peritondan dikkatlice ayırın.
Tokaları kullanarak meme ucunu kaldırın ve kanal açıklığını görüntülemek için dış kısmını dikkatlice kesin. Cilt kapağının kenarını kaldırmak için bir cımbız kullanın ve enjeksiyon karışımını teslim etmek için şırınga iğnesini hafifçe meme ucuna yerleştirin. İzleyici boyanın meme düktal ağacına hareketini izleyin. Boya, stromaya sızmadan düktal ağaca yayılır ve başarılı bir enjeksiyon olduğunu gösterir.
Dökülmeyi önlemek için birkaç saniye bekleyin, ardından iğneyi enjeksiyon bölgesinden yavaşça çıkarın. Yara klipsiyle kesiği kapatın. Aşağıdaki protokolde, fare meme bezine adenovirüs ifade eden Cre'yi teslim etmek için intradüktal enjeksiyon yapacağız.
Cerrahi işlem boyunca aseptik teknikler kullanın. İki dördüncü kasık meme bezi arasında yaklaşık bir santimetre uzunluğunda ciltte bir kesi bölgesi yapın. Meme düktal ağacını görselleştirmek için cilt kapağını parietal peritondan dikkatlice ayırın.
Mikro diseksiyon makası kullanarak yakındaki herhangi bir cildi kesmeden dış meme ucını çıkarmak için saatçileri ile meme uclarını dikkatlice tutun. Cre adenovirüs enjeksiyon karışımının yaklaşık üç ila beş mikrolitresini 33 kalibrelik metal göbek iğnesi yapıştırılmış 25 mikrolitre Hamilton şırıngasına yükleyin.
Karışımda bulunan mavi boyaya dayanarak şırınnadaki enjeksiyon karışımının hacmini tahmin edin. Cilt kapağının kenarını ince kavisli bir cımbızla hafifçe tutun ve mavi boyanın meme ağacına yayılmasını izlerken Cre adenovirüs enjeksiyon karışımını yavaşça meme ucuna enjekte edin. Düktal lümenin zarar görmesini önlemek için enjeksiyon oranını mümkün olduğunca yavaş koruyun.
Başarılı bir intradüktal enjeksiyon, stromal bölmeye sızmadan tüm düktal ağaca yayılan enjekte edilen sıvılarla gösterilir. Enjekte edilen sıvının sızmasını önlemek için iğneyi meme ucuna hafifçe çekin. Meme bezinin distal tarafını veya enjekte edilen meme ucunun çevresini inceleyin.
Burada gösterildiği gibi yakındaki stromaya diffusing boya, başarılı bir intradüktal enjeksiyon yerine meme yağ pedi enjeksiyonu gösterir. Cerrahi yaraları ve cildi yara klipsleriyle kapatın.
Fareyi anesteziden çıkarın ve iyileşme için temiz bir kafesin içindeki bir ısıtma yastığına yerleştirin. Metin protokolünde açıklandığı gibi meme tümörünün gelişimini izleyin.
