内管内注射:マウス乳腺のダクトに注入ミックスを提供する

腸内注射は、癌細胞、発現ベクター、または乳腺のダクトにトレーサー染料を補った治療薬を含む可能性のある注射ミックスを送達する技術である。

この手順では、注射ミックスで注射器をロードします。次に、麻酔付きマウス腹側を外科用ベッドの上に置きます。乳腺のインギナルまたは5番目のペアの間の皮膚に切開を行います.皮膚フラップを頭頂部腹膜から慎重に分離し、管状の木を可視化する。

鉗子を使用して、乳首を持ち上げ、慎重にダクトの開口部を見るためにその外側の部分をカットします。ピンダイザーを使用して皮膚のフラップの端を持ち上げ、注射針を乳首にそっと挿入して注入ミックスを提供します。トレーサー染料の乳腺管の木への動きを監視します。染料は、間質に漏れることなく、ダクタルツリーに広がり、注射に成功したことを示しています。

こぼれを避けるために数秒待ってから、注射部位から針をゆっくりと取り除きます。創傷クリップで切開を閉じます。以下のプロトコルでは、マウス乳腺にアデノウイルスを発現するCreを送達する誘導内注射を行います。

外科処置を通して無菌の技術を使用する。2つの第4のりがれた乳腺の間の約1センチメートルの長さで皮膚に切開部位を作る。乳腺管の木を可視化するように、皮膚フラップを頭頂部腹膜から慎重に分離する。

慎重に時計職人が鉗子で乳首を保持し、マイクロ解剖はさみを使用して近くの皮膚を切断することなく、外装乳首を取り除きます。33ゲージの金属ハブニードルを取り付けた25マイクロリットルハミルトンシリンジに、約3〜5マイクロリットルのクレノウイルス注射混合物をロードします。

注射器中の注入混合物の体積を、混合物に含まれる青色染料に基づいて推定する。細かい湾曲したツイーザーで皮膚フラップの端を静かに保持し、乳腺管の木への青い染料の広がりを監視しながら、クレアデノウイルス注射混合物をゆっくりと乳首に注入します。ダクタルーメンの損傷を避けるために、射出速度をできるだけ遅くしてください。

正常な内管内注入は、間質コンパートメントに漏れることなく、管全体の木全体に広がる注入された液体によって示される。注射液の漏れを避けるために、乳首から針をそっと引き出します。乳腺の遠位または注射された乳首の周囲の領域を調べます。

近くの間質に拡散する染料は、ここに示すように、乳腺脂肪パッド注射が成功したインダクティブ注射ではなく、であることを示す。外科的創傷と皮膚を傷ついたクリップで閉じます。

麻酔からマウスを取り出し、回復のためにきれいなケージの中の加熱パッドの上に置きます。テキストプロトコルに記載されているように、乳腺腫瘍の発達を監視します。