Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
需要订阅 JoVE 才能查看此 内容. 登录或开始免费试用。
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Интрадуктивная инъекция является методом доставки инъекционной смеси, которая может содержать раковые клетки, векторы экспрессии или терапевтический агент, дополненный трассировщиком красителя в протоки молочной железы.
Для этой процедуры загрузите шприц с инъекционной смесью. Далее поместите анестезированной мыши брюшной стороны на хирургическую кровать. Сделайте разрез на коже между паховой или пятой парой молочных желез. Тщательно отделить лоскут кожи от теменной брюшной поли, чтобы визуализировать протоковое дерево.
Используя тиски, поднимите сосок и аккуратно вырежьте его внешнюю часть, чтобы просмотреть отверстие протока. Используйте пинцет, чтобы поднять край лоскута кожи, и осторожно вставить шприц иглы в сосок, чтобы доставить смесь инъекций. Следите за движением следового красителя в молочное протоковое дерево. Краситель распространяется в протоковом дереве, не просачиваясь в строму, что указывает на успешную инъекцию.
Подождите несколько секунд, чтобы избежать утечки, а затем медленно удалить иглу из места инъекции. Закройте разрез зажимом для раны. В следующем протоколе, мы будем выполнять интрадуктивные инъекции для доставки Cre экспрессии аденовируса в молочную железу мыши.
Используйте асептические методы на протяжении всей хирургической процедуры. Сделайте разрез на коже длиной около одного сантиметра между двумя четвертыми паховой молочной железы. Тщательно отделить лоскут кожи от теменной брюшной поли, с тем чтобы визуализировать молочное протоковое дерево.
Тщательно держите сосок с часовщиками тиски, чтобы удалить внешний сосок без резки любой соседней кожи с помощью микро-рассечение ножницами. Загрузите примерно от трех до пяти микролитров смеси инъекций аденовируса Cre в 25 микролитровый шприц Гамильтона с прикрепленной иглой 33-го калибра.
Оцените объем инъекционной смеси в шприце на основе синего красителя, включенной в смесь. Аккуратно удерживайте край лоскута кожи с тонкой изогнутой пинцетом и вводите смесь инъекций Аденовируса Cre медленно в сосок, отслеживая распространение синего красителя в молочное протоковое дерево. Поддерживайте скорость инъекций как можно медленнее, чтобы избежать повреждения протокового люмена.
Успешная интрадуктивная инъекция указывается инъекционными жидкостями, распространяющиеся по всему протоковому дереву без протекания в стромальный отсек. Аккуратно свяжите иглу с соска, чтобы избежать утечки вводимой жидкости. Изучите дистальную сторону молочной железы или прилегающую территорию вводимого соска.
Краситель, рассеянный в близлежащей строме, как показано здесь, указывает на инъекцию молочного жира, а не на успешную инъекцию интрадука. Закройте хирургические раны и кожу зажимами для ран.
Снимите мышь с анестезии и поместите ее на грелку внутри чистой клетки для восстановления. Мониторинг развития молочной опухоли, как описано в текстовом протоколе.
