Injeção intraducional: Entregando mistura de injeção nos dutos da glândula mamária do rato

Uma injeção intradutal é uma técnica de fornecer uma mistura de injeção que pode conter células cancerosas, vetores de expressão ou um agente terapêutico complementado com um corante rastreador em dutos da glândula mamária.

Para este procedimento, carregue uma seringa com a mistura de injeção. Em seguida, coloque um lado ventral do rato anestesiado em uma cama cirúrgica. Faça uma incisão na pele entre o inguinal ou quinto par de glândulas mamárias. Separe cuidadosamente a aba da pele do peritônio parietal para visualizar a árvore ductal.

Usando fórceps, levante o mamilo e corte cuidadosamente sua parte externa para ver a abertura do duto. Use uma pinça para levantar a borda da aba da pele e insira delicadamente a agulha de seringa no mamilo para entregar a mistura de injeção. Monitore o movimento do corante rastreador na árvore ductal mamária. O corante se espalha na árvore ductal sem vazar para o estroma, indicando uma injeção bem sucedida.

Aguarde alguns segundos para evitar derramamentos e, em seguida, remova lentamente a agulha do local da injeção. Feche a incisão com o grampo da ferida. No protocolo a seguir, realizaremos injeção intradutal para entregar cre expressando adenovírus na glândula mamária do rato.

Use técnicas assépticas durante todo o procedimento cirúrgico. Faça um local de incisão na pele em um comprimento de aproximadamente um centímetro entre as duas quatro glândulas mamárias inguinais. Separe cuidadosamente a aba da pele do peritônio parietal, de modo a visualizar a árvore ductal mamária.

Segure cuidadosamente o mamilo com relojoeiros fórceps para remover o mamilo exterior sem cortar nenhuma pele próxima usando uma tesoura de micro-dissecção. Carregue aproximadamente três a cinco microliters da mistura de injeção de adenovírus Cre em uma seringa Hamilton de 25 microliter com uma agulha de hub metálico de calibre 33 afixada.

Estime o volume da mistura de injeção na seringa à base do corante azul incluído na mistura. Segure suavemente a borda da aba da pele com uma pinça curva fina e injete a mistura de injeção de adenovírus Cre lentamente no mamilo enquanto monitora a propagação de corante azul na árvore ductal mamária. Mantenha a taxa de injeção o mais lenta possível para evitar danos ao lúmen ductal.

Uma injeção intradutora bem sucedida é indicada por fluidos injetados espalhados por toda a árvore ductal sem vazar para o compartimento estromal. Retire suavemente a agulha do mamilo para evitar qualquer vazamento do fluido injetado. Examine o lado distal da glândula mamária ou a área circundante do mamilo injetado.

Dilatação de corante no estroma próximo, como mostrado aqui, indica uma injeção de almofada de gordura mamária em vez de uma injeção intradutal bem sucedida. Feche as feridas cirúrgicas e a pele com clipes de ferida.

Retire o rato da anestesia e coloque-o em uma almofada de aquecimento dentro de uma gaiola limpa para recuperação. Monitore o desenvolvimento do tumor mamário conforme descrito no protocolo de texto.