İntradüktal Enjeksiyon: Fare Meme Bezinin Kanallarına Enjeksiyon Karışımı Sağlanması

1. İntradüktal enjeksiyon

1. Cerrahi işlem boyunca aseptik teknikler kullanın.
2. İki dördüncü kasık MG'si arasında ~1 cm uzunluğunda ciltte bir kesi bölgesi yapın (Şekil 1). Meme düktal ağacını görselleştirmek için cilt kapağını (MG ile) parietal peritondan dikkatlice ayırın.
3. Meme ucini Watchmaker'ın ön uçlarıyla dikkatlice tutun ve mikro diseksiyon makası kullanarak yakındaki herhangi bir cildi kesmeden dış meme ucını çıkarın.
4. 33 G metal göbek iğnesi yapıştırılmış 25 μL Hamilton şırıngasına ~3–5 μL Ad-Cre enjeksiyon karışımı yükleyin. Karışımda bulunan mavi boyaya dayanarak şırınnadaki enjeksiyon karışımının hacmini tahmin edin.
   NOT: 3-4 haftalık kadınların MG'lerine enjekte ederken daha küçük bir hacim (örneğin, 3 μL) ve emziren kadınların MG'lerine enjekte ederken daha büyük bir hacim (örneğin, 10 μL) kullanın.
5. Cilt kapağının kenarını ince kavisli bir cımbızla hafifçe tutun ve Ad-Cre enjeksiyon karışımını yavaşça meme ucuna enjekte edin, bu arada mavi boyanın meme ağacına yayılmasını takip edin. Düktal lümenin zarar görmesini önlemek için enjeksiyon oranını mümkün olduğunca düşük tutun.
   NOT: Stromal bölmeye sızmadan tüm düktal ağaca yayılan enjekte edilen sıvı (dahil bromofenol mavi boyası ile gösterildiği gibi) başarılı bir intradüktal enjeksiyona işaret eder.
6. Enjekte edilen sıvının sızmasını önlemek için iğneyi meme ucuna hafifçe çekin.
7. MG'nin distal tarafını (yani meme ucundan uzakta) veya enjekte edilen meme ucunun çevresini inceleyin. Şişme mavi boyanın (yani yakındaki stromaya yayılan boya) başarılı bir intradüktal enjeksiyon yerine meme içi yağ pedi enjeksiyonuna işaret ettiğini unutmayın.
8. Derideki cerrahi yaraları (1,2'den itibaren) yara klipsleriyle kapatın.

2. Ameliyat sonrası bakım

1. Fareyi anesteziden çıkarın ve iyileşme için temiz bir kafesin içindeki bir ısıtma yastığına yerleştirin.
2. Meloksikamı ameliyattan sonra tekrar 5 mg/kg, 24 saat deri altından uygulayın.
3. Hayvanın genel koşullarını izleyin ve 5 gün boyunca kesi alanında enfeksiyon belirtileri arayın.
4. Yara klipsleri ameliyattan ~7-10 gün sonra çıkarılır.

Şekil 1: Ad-Cre virüsünün bir MG'ye intradüktal enjeksiyonunun şematik diyagramı. (A) İki dördüncü MG arasındaki orta çizgide kesi bölgesi. (B) Ad-Cre'nin dördüncü MG'lerden birine mavi bir boya ile (daha iyi görselleştirme için) intradüktal enjeksiyonu. (C) Ciltteki kesiğin yara klipsleriyle kapatılması