Интрадуктивная инъекция: Доставка инъекций Mix в протоки мыши молочной железы

1. Интрадуктивная инъекция

1. Используйте асептические методы на протяжении всей хирургической процедуры.
2. Сделайте разрез на коже длиной 1 см между двумя четвертыми паховой MGs(рисунок 1). Тщательно отделить лоскут кожи (с MG) от теменной брюшной полы, с тем чтобы визуализировать молочного протокового дерева.
3. Тщательно держите сосок с тиски Watchmaker и удалить внешний сосок без резки любой соседней кожи, используя микро-рассечение ножницами.
4. Загрузите 3-5 мкл инъекционной смеси Ad-Cre в шприц Гамильтона 25 х 8 с прикрепленной иглой 33 G-концентратора. Оцените объем инъекционной смеси в шприце на основе синего красителя, включенной в смесь.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте меньший объем (например, 3 йл) при введении в МГ 3-4 недельных самок и больший объем (например, 10 МКЛ) при введении в МГ кормящих самок.
5. Аккуратно удерживайте край лоскута кожи с тонкой изогнутой пинцетом и впрыскиваете смесь инъекций Ad-Cre медленно в сосок, тем временем отслеживая распространение синего красителя в молочное протоковое дерево. Поддерживайте скорость инъекций как можно более низко, чтобы избежать повреждения протокового люмена.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Инъекционная жидкость (о чем свидетельствует включенный бромофенол синий краситель), распространяющаяся по всему протоковому дереву без утечки в стромальный отсек, указывает на успешную инъекцию интрадука.
6. Аккуратно свяжите иглу с соска, чтобы избежать утечки вводимой жидкости.
7. Изучите дистальную сторону (т.е. вдали от соска) МГ или прилегающую территорию вводимого соска. Обратите внимание, что отек синего красителя (т.е. красителя, рассеянного в близлежащих стромы) указывает на молочный жир площадку инъекции, а не успешной интрадуктивной инъекции.
8. Закрыть хирургические раны (от 1,2) в коже с раны клипс.

2. Послеоперационный уход

1. Снимите мышь с анестезии и поместите ее на грелку внутри чистой клетки для восстановления.
2. Администрирование мелоксикам подкожно на 5 мг/кг снова, 24 ч после операции.
3. Мониторинг общих условий животного и искать признаки инфекции в месте разреза в течение 5 дней.
4. Зажимы для ран удаляются через 7-10 дней после операции.

Рисунок 1: Схема диаграммы интрадуктивной инъекции вируса Ad-Cre в MG. (A) Разрез сайта в средней линии между двумя четвертыми MGs. (B) Интрадуктивной инъекции Ad-Cre с синим красителем (для лучшей визуализации) в один из четвертыхMGs.( C ) Закрытие разреза в коже раны клипы