内管内注射:マウス乳腺のダクトに注入ミックスを提供する

1. 内管内注射

1. 外科処置を通して無菌の技術を使用する。
2. 2つの第4のインギナルMGsの間の〜1cmの長さで皮膚の切開部位を作る(図1)。乳腺管の木を視覚化するように、皮膚フラップ(MG)を頭頂部腹膜から慎重に分離します。
3. 慎重にウォッチメーカーの鉗子で乳首を保持し、マイクロ解剖はさみを使用して、近くの皮膚を切断することなく、外装乳首を取り外します。
4. 33 Gの金属ハブニードルを取り付けた25 μLハミルトンシリンジにAd-Cre注入混合物の負荷は3〜5 μL。注射器中の注入混合物の体積を、混合物に含まれる青色染料に基づいて推定する。
   注: 3~4週齢の雌のMGに注入する場合は、より小さい容積(例えば3μL)を使用し、授乳中の雌のMGに注入する場合は、より大きな体積(例えば、10μL)を使用してください。
5. 細かい湾曲したトゥイザーで皮膚フラップの端を静かに保持し、乳首にゆっくりとAd-Cre注入混合物を注入し、一方で乳腺管状の木に青い染料の広がりを監視します。ダクタルーメンの損傷を避けるために、射出速度をできるだけ低くしてください。
   注: 間質コンパートメントに漏れることなく管全体に広がる注入された流体(含まれているブロモフェノール青色素によって示されるように)は、正常な内管内注入を示す。
6. 注射液の漏れを避けるために、乳首から針をそっと引き出します。
7. MGまたは注入された乳首の周囲の領域の遠位側(すなわち、乳首から離れている)を調べる。なお、青色染料の膨潤(すなわち、染色が近くの間質に拡散する)は、乳腺脂肪パッド注射ではなく、乳腺脂肪パッド注射を成功させたことを示している。
8. 皮膚の外科的創傷(1.2から)を傷クリップで閉じます。

2. 術後ケア

1. 麻酔からマウスを取り出し、回復のためにきれいなケージの中の加熱パッドの上に置きます。
2. 術後24時間、再び5mg/kgで皮下にメロキシカムを投与する。
3. 動物の一般的な状態を監視し、5日間の切開部位で感染の兆候を探します。
4. 創傷クリップは手術後7~10日で除去されます。

図1:MGへのAd-Creウイルスの誘導内注入の概略図。(A) 2つの4番目のMGs(B)青い色素を用いたAd-Creのインタクタル注入(より良い視覚化のために)第4のMGの1つ(C)創傷クリップによる皮膚の切開の閉鎖の間の正中線の切開部位