MicroRNA (miRNA) 是一类内源性表达的非编码,±21 nt 小型RNA参与植物和动物基因表达的调控。大多数miRNA充当针对关键基因的基因表达的负开关。在植物中,原发性miRNA(原始miRNA)转录本由RNA聚合酶II生成,它们形成不同长度的稳定茎环结构,称为前miRNA。内核糖酶,像迪瑟一样1,将预米RNA处理成miRNA-miRNA*双工。从miRNA-miRNA* 双面的一股被选择并加载到Argonaute 1蛋白或其同源体上,以调解目标mRNA的裂解。虽然miRNA是关键信号分子,但它们的检测通常采用不太理想的基于PCR的方法,而不是敏感的北方印迹分析。我们描述了一种简单、可靠和极其敏感的北方方法,它非常适合从任何植物组织中对具有极高灵敏度的 miRNA 水平进行定量。此外,此方法可用于确认米RNA及其前体的尺寸、稳定性和丰度。
Introduction
最近发现的小型调控RNA,微RNA,已经领导了研究,了解它们及其在植物和动物中的作用1。miRNA的长前体由HYL1和特定的骰子样蛋白质2,3加工成21至24nt成熟的3miRNA。22 nt miRNA 可以通过生成二级 siRNA4启动级联沉默。研究表明,miRNA和二级siRNA在发育、细胞命运和压力反应5,6,中的作用。
Tirumalai, V., Prasad, M., Shivaprasad, P. V. RNA Blot Analysis for the Detection and Quantification of Plant MicroRNAs. J. Vis. Exp. (161), e61394, doi:10.3791/61394 (2020).