이 방법은 급진적 인 전립선 절제술을 따르는 바이오 뱅킹 조직이 샘플링 절차를 안내하기 위해 전립선 암 환자에 대한 임상 진단 데이터를 활용하는 것을 포함합니다. 이것은 다운스트림 응용의 넓은 범위에 대한 새로운 조직의 효율성과 가용성에 관한 이전에 게시 된 방법과 문제를 극복한다.
바이오 뱅킹 전립선 조직에 대한 이전 방법, 급진적 인 전립선 절제술다음, 일반적으로 무작위 샘플링을 포함. 효율성을 높이고 더 넓은 범위의 다운스트림 응용을 가능하게 하기 위해 전립선 조직을 샘플링하는 보다 표적화된 방법이 개발되었습니다. 여기에서 우리는 자기 공명 화상 진찰 (MRI) 및 생검 데이터를 둘 다 샘플링을 위한 기관의 특정 지역을 표적으로 하기 위하여 이용합니다. 이 방법은 전립선의 소정의 영역에서 5mm 횡방향 슬라이스를 제거하고, 이 슬라이스의 소정의 영역에서 6mm 펀치 생검을 제거한 다음 이전에 출판된 전립선 슬라이스 장치의 사용을 포함한다. 이러한 샘플은 바이오뱅킹 을 목적으로 냉동 또는 고정저장될 수 있거나, 무작위 샘플링 접근법으로부터 10% 신뢰와 비교하여 종양 함량의 70% 신뢰도를 가지고 즉시 신선히 사용할 수 있다. 이것은 게놈, proteomics 또는 조직학 일과 같은 모든 표준 다운스트림 기술의 사용을 가능하게 합니다, 그러나 또한 살아있는 조직 화상 진찰 또는 ex vivo 문화와 같은 신선한 조직을 요구하는 작동합니다.
고품질 인간 전립선암 조직에 대한 접근은 현장에서 효과적인 연구를 추진하는 데 중요한 요구 사항입니다. 연구를 위한 급진적인 전립선 절제술다음 전립선 조직을 견본하는 기존 방법의 수가 있습니다. 전형적으로 이들은 전립선 조직의 신선, 동결 또는 고정된 조각에서 무작위 견본을 취하기 위하여 펀치 생검을 사용하여 관련시키고, 에 의해 평가된 것과 같이 헤마톡실린 & 에오신 (H&E)에 의해 각 견본에서 종양이 존재하는지 여부를 소급확인합니다 비뇨기과 의사1,2,3,4,5. 최근 검토는 이러한 기존 방법의 개요를컴파일했다 6. 이러한 방법은 국제 암 게놈 컨소시엄 (ICGC) 및 암 게놈 아틀라스 (TCGA)와 같은 대규모 게놈 분석과 같은 나중에 종양 함량을 위해 조직을 저장하고 평가 할 수있는 특정 다운 스트림 응용 프로그램에 유용합니다. 4,7. 그러나, 이 방법은 우리가 자기 공명 화상 진찰 (MRI) 및/또는 생검 데이터를 표본 추출을 위한 전립선의 특정 지역을 표적으로 하기 위하여 이용하는 경우에 에 향상될 수 있었습니다. 이렇게 하면 두 가지 방법으로 방법론이 향상됩니다. 첫째, 수집된 조직 샘플의 수를 줄이고, 효율성을 높이고, 병리학 부서에 대한 압력과 저장 비용을 감소시킴으로써, 둘째, 신선한 조직이 즉각적인 확인 없이 즉시 사용될 수 있도록 함으로써 종양 함량, 살아있는 조직 화상 진찰, 오르가노이드 생성 또는 생체 배양과 같은 예술 다운스트림 기술의 새로운 상태에 대한. 이러한 연구의 필요성은 PEOPLE(rEsearch용 PatiEnt prOstate samPLes) 방법의 개발로 이어졌으며, PEOPLE을 이용한 바이오뱅크의 첫 84례의 결과는 최근8건의공표되었다. 이 방법의 변형은 또한 3차원(3D) 인쇄슬라이싱 장치 및 환자 특이적 몰드와 함께 출판되었으며, 사전 및 사후 고정 조직9,10에생체 내 MRI를 용이하게 하기 위해.
이 프로토콜 내의 중요한 단계는 샘플링을 위한 종양 지역, 전립선의 측정 및 조직 샘플링을 포함합니다. 첫째, 샘플링의 정확한 영역을 식별하기 위한 MRI의 측정이 중요합니다. 우리는 함께 비디오에서이 방법을 보여 줍니다. 그러나, 우리는 또한 첫번째 인스턴스에 있는 방사선 전문의와 측정을 확인하는 것을 추천합니다. 인덱스 병변을 포함하는 MRI 심상의 지역을 향해 연구원을 가리키는 명확한 임상 노트는 이상적이다. 둘째, 전립선의 측정은 눈금자가 전립선의 앞쪽과 평행하게 기지에서 정점에 이르는 전체 길이를 측정하기 위해 각도로 유지되도록주의하여 수행되어야합니다. 셋째, 종양 부위는 원래 MRI 이미지와 관련하여 조직 조각을 육안으로 검사하고 조직을 촉지 (어떤 경우에는 종양 영역이 더 조밀하게 느낄 수 있음) 및 조직의 색상을 시각적으로 평가하여 샘플링하기 전에 확인되어야합니다 (일부 경우) 종양이 주변 양성 조직보다 더 창백하게 나타날 것입니다).
이 프로토콜은 비 임상 박사 후 연구원, 병리학 연구원, 병리학 컨설턴트 및 연구 기술자에 의해 UCL/UCLH에서 전체적으로 수행되었습니다. 우리의 경험에서 프로토콜의 모든 단계는 기술적 배경에 관계없이 10 가지 미만의 사례에서 배울 수 있습니다. 그러나, 우리는 MRI 측정및 첫번째 인스턴스에 있는 슬라이스에 관하여 병리학자에게서 훈련에 관하여 방사선학자에게서 훈련을 추천합니다. 프로토콜은 이전에 게시된10과같이 3D 인쇄 슬라이싱 핸들을 사용하여 수정할 수 있습니다.
기술의 잠재적인 한계는 진단에 방해의 리스크를 포함합니다. 전립선을 자르는 것은 중요한 단계이며, 잘못 수행하면 등급 또는 양수 마진율에 방해가 될 수 있습니다. 여기에는 두 가지 잠재적인 문제가 있습니다. 첫째, 모든 색인 병변이 제거되고 신선한 조직 실험을 위해 즉시 사용되는 경우, 일상적인 임상 진단은 이 병변에 대해 수행되지 않으며 환자는 더 낮은 등급의 암을 갖는 것으로 잘못 진단될 수 있다. 이를 피하기 위해 연구원은 샘플링 전에 사례를 정기적으로 검토하고 촬영 할 샘플의 수와 위치에 동의하는 컨설턴트 병리학자와 샘플링 계획을 논의해야합니다. 작은 종양은 이러한 이유로 국소적으로 제외될 수 있다. 둘째, 전립선 캡슐이 고정하기 전에 코르크 보드에 올바르게 고정되지 않으면 내부 조직이 고정 중에 바깥쪽으로 부풀어 오르도록하여 수술 마진을 변경할 수 있습니다. 이것은 거짓 양성 마진으로 이끌어 낼 수 있었습니다, 나머지 종양은 조직 뒤틀기 때문에 순전히 캡슐에 상주하는 것처럼 보입니다.
기존 방법에 관하여 이 기술의 중요성은 주로 종양 표적으로 거짓말. 급진적 인 전립선 절제술 표본을 샘플링하기위한 방법의 범위는 현재까지 출판되었습니다; 그러나, 이들은 모두 완전히 또는 부분적으로 임의의 샘플링 접근 방식에 의존1,2,3,4,5,6,7. 여기에서 생검 및 특히 MRI 데이터의 사용은 종양 조직을 얻기의 증가한 신뢰와 감소된 표본 추출을 허용하는 효율성을 향상시켰습니다8.
이 방법의 향후 응용 프로그램은 이전 샘플링 방법보다 더 넓은 범위의 다운스트림 기술을 채택할 수 있습니다. 예를 들면, 종양인의 높은 확률이 있는 신선한 조직의 가용성은 많은 견본이 종양의 존재를 지키기 위하여 요구되지 않기 때문에 더 비싸고 노동 집약적인 신선한 조직 기술이 이용될 수 있다는 것을 의미합니다. 이는 전 생체 배양, 생체 내 MRI, 고급 이미징 및 전사체를 포함하며 이에 한정되지 않을 수 있다.
The authors have nothing to disclose.
저자는 전립선 암 영국 우수 및 여행 상 펠로우십 (TLD-PF16-004)와 혁신 (PG14-018-TR2)에서 HP의 밑에 자금 조달을 위한 전립선 암 UK를 인정하고 자합니다. 이 일은 건강 연구 대학 대학 런던 병원 생물 의학 연구 센터에 있는 연구원에 의해 지원되었습니다.
6 mm biopsy punch | Fisher Scientific | 13404607 | Disposable biopsy punches for removing 6 mm tissue samples |
Black Ink | Leica Biosystems | 3801753 | Tissue marking & margin dye |
Blue Ink | Leica Biosystems | 3801751 | Tissue marking & margin dye |
Chainmail hand glove | Arco | 1456803 | Chainmail gloves to protect hand during slicing |
Cork board | Fisher Scientific | 12396447 | Cork board for pinning prostate to following sampling procedure |
Needles | SLS (Scientific Laboratory supplies) | SYR6112 | Sterile needles to use to pin tissue to cork board following sampling |
Prostate slicing aparatus | Insitute of Cancer Research, London | NA – must be obtained under MTA | A kit containing the slicer handle, blades, spacer, base, walls and pins |