この方法は、ラジカル前立腺切開術後のバイオバンキング組織のサンプリング手順を導くために前立腺癌患者の臨床診断データの利用を含む。これにより、より広範な下流アプリケーション向けの新鮮な組織の効率性と可用性に関する以前に公開された方法の問題を克服できます。
前立腺組織をバイオバンキングするための以前の方法は、ラジカル前立腺切開術に続いて、一般的にランダムサンプリングを伴う。効率を高め、より広範な下流アプリケーションを可能にするために、前立腺組織をサンプリングするより標的化された方法が開発された。ここでは、磁気共鳴イメージング(MRI)と生検データの両方を使用して、サンプリングのために臓器の特定の領域を標的にします。この方法は、前立腺の所定の領域から5mmの横スライスを除去する以前に公開された前立腺スライス装置の使用を含み、続いて、このスライスの所定の領域から6mmのパンチ生検を除去する。これらのサンプルは、バイオバンキングの目的で凍結または固定保存することも、ランダムサンプリングアプローチからの10%の信頼度と比較して、腫瘍含有量の70%の信頼度ですぐに新鮮に使用することができます。これにより、ゲノミクス、プロテオミクス、組織学的研究などの標準的な下流技術を使用できますが、生組織イメージングや生体内培養などの新鮮な組織を必要とする作業も可能になります。
高品質のヒト前立腺癌組織へのアクセスは、現場で効果的な研究を推進するための重要な要件です。研究のための根本的な前立腺切開術後に前立腺組織をサンプリングする既存の方法の数があります。通常、これらは、前立腺組織の新鮮な、凍結または固定されたスライスからランダムなサンプルを採取するためにパンチ生検を使用し、ヘマトキシリン&エオシン(H&E)によって評価された各サンプルに腫瘍が存在するかどうかを遡及的に確認することを含む。泌尿器科医1,2,3,4,5.最近のレビューでは、これらの既存のメソッドの概要をまとめた6.これらの方法は、国際がんゲノムコンソーシアム(ICGC)やがんゲノムアトラス(TCGA)のような大規模なゲノム解析など、後日組織を保存して腫瘍含有量を評価できる特定の下流アプリケーションに役立ちます。4,7.しかし、磁気共鳴イメージング(MRI)や生検データを使用してサンプリングのために前立腺の特定の領域を標的にする場合、これらの方法は改善される可能性があります。これにより、2 つの方法で方法論が改善されます。第一に、採取した組織サンプルの数を減らすことで、効率を高め、病理学部門への圧力を低減し、第二に、新鮮な組織を即時に確認することなくすぐに使用できるようにすることで、腫瘍含有量は、生組織イメージング、オルガノイド生成またはex vivo培養などの最先端の下流技術の新しい状態のために。この研究の必要性は、PEOPLE(rEsearchのためのPatiEnt prOstate samPr)法の開発につながり、PEOPLEを用いてバイオバンクされた最初の84症例の結果が最近8に発表された。この方法のバリエーションはまた、3次元(3D)印刷スライス装置および患者特異的金型で公表されており、固定前および後固定組織9、10上のex vivo MRIを容易にするために。
このプロトコル内の重要なステップには、サンプリングのための腫瘍領域の同定、前立腺の測定、および組織サンプリングが含まれます。まず、サンプリングの正しい領域を識別するためのMRIの測定が重要である。この方法は、付属のビデオで示します。ただし、最初のインスタンスでは放射線科医による測定値の確認もお勧めします。インデックス病変を含むMRI画像の領域に向かって研究者を指す明確な臨床ノートが理想的です。第二に、前立腺の測定は注意して行われるべきであり、定規は前立腺の前平に平行に、ベースから頂点までの全長を測定する角度で保持されることを保証する。第三に、腫瘍領域は、元のMRI画像に関連して組織スライスを視覚的に検査し、組織を触診し(場合によっては腫瘍領域がより密に感じられる)、組織の色を視覚的に評価することによって、サンプリング前に確認する必要があります(一部の場合)。腫瘍が周囲の良性組織よりも青白く見える場合)。
このプロトコルは、非臨床ポストドクター研究者、病理学フェロー、病理学コンサルタント、および研究技術者によってUCL/UCLHで完全に実施されています。私たちの経験では、プロトコルのすべてのステップは、技術的な背景に関係なく、10のケースの下で学ぶことができます。しかし、最初のインスタンスでのスライスに関する病理学者からのMRI測定とトレーニングに関する放射線科医からのトレーニングをお勧めします。プロトコルは、以前に公開された10のように、3D 印刷されたスライス ハンドルを使用して変更できます。
技術の潜在的な制限は、診断を妨げるリスクが含まれます。前立腺のスライスは重要なステップであり、間違って行われた場合、グレーディングまたは正のマージンレートを妨げる可能性があります。ここには 2 つの潜在的な問題があります。第一に、すべてのインデックス病変を除去し、すぐに新鮮な組織実験に使用した場合、定期的な臨床診断はこの病変に対して行われず、患者は低グレードの癌を有すると誤診される可能性がある。これを回避するために、研究者は、サンプリングの前に定期的にケースをレビューし、採取するサンプルの数と場所に合意するコンサルタント病理学者とサンプリング計画について話し合う必要があります。小さな腫瘍は、この理由から局所的に除外されてもよい。第二に、前立腺カプセルが固定前にコルク板に正しく固定されていない場合、これは、内組織が固定中に外側に膨らみ、外科的マージンを変更することができます。これは偽陽性マージンにつながる可能性があります, 残りの腫瘍は、組織のワープのために純粋にカプセルに存在するように見えます.
既存の方法に関するこの技術の重要性は、主に腫瘍標的に関する。ラジカル前立腺腫瘍標本をサンプリングするための方法の範囲は、現在までに公開されています。しかし、これらはすべて、完全または部分的にランダムなサンプリングアプローチ1、2、3、4、5、6、7に依存しています。生検および特にMRIデータの使用は、効率を改善し、腫瘍組織8を得ることの信頼性を高めたサンプリングの減少を可能にした。
この方法の将来のアプリケーションは、以前のサンプリング方法よりも広い範囲のダウンストリーム技術を採用することを可能にします。例えば、腫瘍である可能性が高い新鮮な組織の可用性は、腫瘍の存在を確保するために多くのサンプルが必要とされないので、より高価で、または労働集約的な新鮮な組織技術を利用できることを意味する。これには、ex vivo培養、ex vivo MRI、高度なイメージングおよびトランスクリプトミクスが含まれ、これらに限定されない。
The authors have nothing to disclose.
著者らは、前立腺癌英国優秀・旅行賞フェローシップ(TLD-PF16-004)およびHPの下で前立腺癌英国の資金調達のために英国前立腺癌を認めたいと考えています(PG14-018-TR2)。この研究は、国立衛生研究所カレッジロンドン病院生物医学研究センターの研究者によって支援されました。
6 mm biopsy punch | Fisher Scientific | 13404607 | Disposable biopsy punches for removing 6 mm tissue samples |
Black Ink | Leica Biosystems | 3801753 | Tissue marking & margin dye |
Blue Ink | Leica Biosystems | 3801751 | Tissue marking & margin dye |
Chainmail hand glove | Arco | 1456803 | Chainmail gloves to protect hand during slicing |
Cork board | Fisher Scientific | 12396447 | Cork board for pinning prostate to following sampling procedure |
Needles | SLS (Scientific Laboratory supplies) | SYR6112 | Sterile needles to use to pin tissue to cork board following sampling |
Prostate slicing aparatus | Insitute of Cancer Research, London | NA – must be obtained under MTA | A kit containing the slicer handle, blades, spacer, base, walls and pins |