CRAF-14-3-3 Interaction Analysis in Live Cells Using a BRET-Based Approach

March 01, 2024

Ensaio baseado em transferência de energia por ressonância de bioluminescência (BRET) para medir interações de CRAF com proteínas 14-3-3 em células vivas

01:07 min
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Transfecção de células 293FT com construções de expressão de pCMV5-NanoLuc-CRAF e pCMV5-14-3-3ζ-halo

02:01 min
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Preparando células de 293FT transfectadas com pCMV5-NanoLuc-CRAF e pCMV5-14-3-3ζ-Halo para ensaio de emissão de BRET

03:39 min
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1Department of Cell and Molecular Pharmacology and Experimental Therapeutics,Medical University of South Carolina, 2Hollings Cancer Center,Medical University of South Carolina, 3Laboratory of Cell and Developmental Signaling, Center for Cancer Research,National Cancer Institute-Frederick

Summary

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Este protocolo descreve um ensaio baseado em BRAKET para medir as interações da quinase CRAF com proteínas 14-3-3 em células vivas. O protocolo descreve as etapas para preparar as células, ler as emissões de BRET e analisar dados. Um exemplo de resultado com identificação de controles apropriados e solução de problemas para otimização de ensaio também é apresentado.

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