H型高血圧ラットにおけるHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬の降圧効果と機序
Summary
ここでは、H型高血圧を誘発し、胃内に投与されたHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬(HTJDTLD)の降圧効果を評価するためのプロトコルを紹介します。H型高血圧のラットでは、HTJDTLDは効果的な降圧効果を示し、おそらく小胞体(ER)ストレス誘発性アポトーシス経路の活性化の阻害と関連していました。.
Abstract
血漿ホモシステイン(Hcy)レベルの上昇を特徴とする高血圧の特定の形態であるH型高血圧症は、世界中で主要な公衆衛生上の課題となっています。この研究では、血管狭窄の治療に一般的に使用される非常に効果的な伝統的な漢方薬処方であるHuotan Jiedu Tongluo煎じ薬(HTJDTLD)の降圧効果と根本的なメカニズムを調査しました。ラットのH型高血圧症の誘発にはメチオニンを用い、HTJDTLDを胃内に投与した。次に、ラットの尾側動脈の収縮期血圧と拡張期血圧を非侵襲的ラット尾側マノメトリーによって測定しました。大動脈の組織学的評価は、ヘマトキシリン-エオシン(HE)染色によって行われました。酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)を使用してHcyレベルを測定し、定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(qRT-PCR)およびウェスタンブロッティングを使用して、グルコース調節タンパク質78(GRP78)、腫瘍壊死因子(TNF)受容体関連因子2(TRAF2)、c-Jun N末端キナーゼ(JNK)、およびカスパーゼ-3のmRNAおよびタンパク質レベルを決定しました。その結果、HTJDTLDはメチオニン治療後に血圧を有意に低下させ、病理組織学的病変を緩和し、Hcyレベルを低下させることが示されました。さらに、HTJDTLDは、主に小胞体(ER)ストレス誘発性アポトーシス経路に関与するGRP78、JNK、TRAF2、およびカスパーゼ3の遺伝子およびタンパク質の発現を有意に阻害しました。全体として、結果は、HTJDTLDがH型高血圧のラットに効果的な降圧効果を示し、ERストレス誘発性アポトーシス経路活性化の阻害に関連する降圧メカニズムを明らかにしました。
Introduction
高血圧は、心臓発作、脳卒中、腎不全の主要な危険因子であり、世界中で10億人が罹患する公衆衛生上の大きな課題となっています1。チオール基含有アミノ酸であるホモシステイン(Hcy)は、メチオニン代謝の重要な代謝中間体です。血漿Hcyレベルが上昇した高血圧は、H型高血圧症と定義され、脳卒中などの心脳血管疾患の発生と再発の重大な危険因子となる可能性があります2,3。最近の研究では、H型高血圧症の併存が心血管疾患や脳血管疾患の副作用を悪化させる可能性があることが報告されています4。特に、中国のH型高血圧症の患者の75%が原発性高血圧症であり、これは生活の質に深刻な影響を及ぼしています5。現在、H型高血圧症の治療には主に西洋医学が含まれています。ただし、特定の副作用やコンプライアンスの低下を引き起こす可能性があり、H型高血圧の包括的な管理のニーズを満たすことができなくなりました。
中国伝統医学(TCM)は、中国で2,000年以上の歴史を持つユニークなリソースです。西洋医学における高血圧コントロールのアンメットニーズにより、臨床医は H型高血圧症の予防と治療におけるTCMの潜在的な役割を検討し始めています6。Huotan Jiedu Tongluo Decoction (HTJDTLD) は、Yue Deng 教授が広範な臨床専門知識から考案した伝統的な漢方薬の処方です7.HTJDTLDは、20年以上にわたる臨床応用を通じて、心血管疾患や脳血管疾患の治療において顕著な有効性を示してきました1。しかし、HTJDTLDがH型高血圧症に治療効果があるかどうかは報告されていません。そこで、H型高血圧ラットにおけるHTJDTLDの降圧効果と特異的なメカニズムを探り、H型高血圧の治療薬候補を特定することを目指しました。
Protocol
すべての動物実験は、長春中医薬大学の動物実験委員会(IACUC)によって承認されました。材料は 資料表に記載されています。 1. 動物と治療 合計 50 匹の成体自然高血圧ラット (SHR) (雄、50 日齢) を、対照 (CON)、メチオニン (MET)、MET + HTJDTLD + マレイン酸エナラプリル (EM)、MET + EM、および MET + HTJDTLD グループの 5 つのグループに無作為に分け?…
Representative Results
表4および表5に示すように、収縮期血圧(SBP)および拡張期血圧(DBP)は、1週間から4週間まで、MET群の方がCON群よりも有意に高かった。HTJDTLD処理後、ラットのSBPおよびDBPはMET群のSBPおよびDBPよりも有意に低かった。特に、HTJDTLDとEMの併用は、HTJDTLD治療単独よりも強い降圧効果を示しました。 HE染色とMassonのトリクローム染色によれば、大動脈血管壁?…
Discussion
高血圧は、成人人口の3分の1が罹患し、脳卒中、冠状動脈性心臓病、心不全、腎不全などのリスクを高める最も一般的な心血管疾患の1つです8。H型高血圧症は、原発性高血圧症とホモシステイン濃度の上昇が同時に起こることを指す特殊なタイプの高血圧症であり、長年にわたって広く注目を集めてきました9。近年、経口EMと降圧薬の併用により、血圧の?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、吉林省国家自然科学基金会(no.YDZJ202301ZYTS189)。
Materials
| 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR | Yeasen,China | 11149ES | cDNA synthesis kit |
| Anti-beta-actin antibody | Bioss, China | bs-0061R | |
| Anti-caspase-3 antibody | Bioss, China | bs-0081R | |
| Anti-GPR78 antibody | Abcam, USA | ab108513 | |
| Anti-JNK antibody | Abcam, USA | ab76572 | |
| Anti-p-JNK antibody | Bioss, China | bsm-52462R | |
| Anti-rabbit IgG antibody | Bioss, China | bs-0295G-HRP | |
| Anti-TRAF2 antibody | Bioss, China | bs-22372R | |
| Bio-Rad CFX96 Touch system | Bio-Rad | CFX96 | real-time PCR detection system |
| ECL Western Blot Substrates | Merck, MA, USA | WBULP-10ML | |
| Enalapril maleate folic acid tablets | Yangzijiang Pharmaceutical Company, China | 20040991 | |
| FastStart SYBR Green Master | Sigma | FSSGMMRO | |
| Fructus Trichosanthis | The First Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, China | No catalog number | |
| Hirudo | The First Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, China | No catalog number | |
| intelligent noninvasive sphygmomanometer | Beijing Softron Biotechnology company | BP-2010A | |
| Lonicerae Japonicae Flos | The First Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, China | No catalog number | |
| Methionine | Sigma, USA | M9500 | |
| Radix Angelicae Sinensis | The First Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, China | No catalog number | |
| Radix et Rhizoma Glycyrrhizae | The First Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, China | No catalog number | |
| Radix et Rhizoma Nardostachyos | The First Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, China | No catalog number | |
| Radix et Rhizoma Rhodiolae Crenulatae | The First Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, China | No catalog number | |
| Radix et Rhizoma Salviae Miltiorrhizae | The First Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, China | No catalog number | |
| Radix Scrophulariae | The First Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine, China | No catalog number | |
| Rat Hcy ELISA Kits | Shanghai Meimian Industrial Company, China | MM-0293R2 | |
| RIPA buffer | Shanghai Beyotime Biotechnology company | P0013B |
References
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Cite This Article
Shen, J., Hu, C., Li, Y., Shang, X., Deng, Y., Guo, J., Zhang, L., Wang, J., Zhang, W. The Antihypertensive Effects and Mechanisms of Huotan Jiedu Tongluo Decoction in Rats with H-Type Hypertension. J. Vis. Exp. (207), e65932, doi:10.3791/65932 (2024).