Inducción de la inflamación de la superficie ocular y recolección de tejidos afectados

Cada parpadeo de un ojo repone la suave película lagrimal dispersa sobre la córnea. Los epitelios de la superficie ocular facilitan la distribución y correcta orientación de la película lagrimal sobre la superficie ocular. Las mucinas son proporcionadas por la córnea y las células epiteliales de la conjuntiva para ayudar a colocar la parte acuosa de la película lagrimal proveniente de las glándulas lagrimales en la superficie de los ojos. Finalmente, la MG secreta lípidos que crean una capa de recubrimiento que evita la evaporación de la parte acuosa de la película lagrimal ^1,2,3. De esta manera, las funciones coordinadas de todos los órganos oculares protegen la superficie ocular de patógenos invasores o lesiones y apoyan una visión cristalina sin ningún dolor o molestia.

En una superficie ocular sana, la secreción ocular que fluye o el reuma ocular barre el polvo, las células epiteliales muertas, las bacterias, el moco y las células inmunitarias. Las trampas extracelulares agregadas de neutrófilos (aggNET) formulan una matriz en forma de malla compuesta de cromatina extracelular e incorporan estos componentes en el reuma del ojo. Los AggNET resuelven la inflamación por la degradación proteolítica de citoquinas y quimiocinas proinflamatorias⁴. Sin embargo, cuando se vuelven disfuncionales, estos aggNET aberrantes impulsan la patogénesis de enfermedades como las oclusiones vasculares en COVID-19⁵, cálculos biliares⁶ y sialolitiasis⁷. Del mismo modo, los aggNET en la superficie ocular desempeñan un papel protector y contribuyen a resolver la inflamación de la superficie altamente expuesta⁸. Una formación exagerada o la falta de aggNET en la superficie ocular pueden afectar la estabilidad de la película lagrimal y / o causar heridas corneales, conjuntivitis cicatrizante y enfermedad del ojo seco. Por ejemplo, la obstrucción de la MG es una de las principales causas de enfermedad del ojo seco⁹. También se sabe que los AggNET tapan el flujo de secreción de lípidos de los conductos de MG y causan disfunción de la glándula de Meibomio (MGD). La congestión de los orificios de MG por aggNETs causa una falta de líquido graso que envuelve la superficie ocular y líquido retrógrado embotellado, lo que resulta en disfunción de la función de la glándula y daño acinar. Esta disfunción puede provocar evaporación de la película lagrimal, fibrosis de los márgenes de los párpados, inflamación ocular y daño perjudicial a la MG^10,11.

Varios modelos animales se han desarrollado a lo largo de los años para imitar el proceso patológico de MGD en humanos. Por ejemplo, los ratones C57BL/6 de 1 año de edad han ayudado a estudiar los efectos relacionados con la edad sobre la enfermedad del ojo seco (DED) y la MGD, reflejando la patología de la enfermedad ocular en pacientes de 50 años o más^12,13,14. Además, los conejos son modelos apropiados para investigar los efectos de las intervenciones farmacológicas. Por lo tanto, la inducción de MGD en conejos ha sido reportada por la administración tópica de epinefrina o la introducción sistémica de ácido 13-cis-retinoico (isotretinoína)15,16,17,18,19.

Aunque estos modelos animales fueron adecuados para determinar los diferentes factores que contribuyen a la fisiopatología de la DGM, fueron restringidos en su utilización. Por ejemplo, el modelo murino de DGM relacionado con la edad era ideal para descifrar elementos solo en adultos mayores y, por lo tanto, los conejos parecían ser el modelo animal más adecuado para estudiar las enfermedades de la superficie ocular, ya que permiten la investigación de múltiples mecanismos fisiopatológicos. Sin embargo, debido a la falta de herramientas analíticas integrales para detectar proteínas en la superficie ocular y debido a que muchas partes del genoma del conejo no están anotadas, están limitadas para las investigaciones^20,21.

Además, estos modelos animales utilizados para investigar la patogénesis de la enfermedad del ojo seco no proporcionaron detalles adecuados para analizar el brazo inmunológico del trastorno que instiga la inflamación de la superficie ocular. En consecuencia, el modelo murino de DGM desarrollado por Reyes et al. mostró una asociación entre la enfermedad ocular alérgica en ratones y la DGM en humanos y destacó la etiología inmune responsable de la MGD obstructiva²¹. Este modelo asocia la enfermedad ocular alérgica con una respuesta TH17 que recluta neutrófilos a la conjuntiva y al párpado, causando DGM e inflamación ocular crónica²¹. La inducción de DGM e inflamación ocular en este modelo murino es una herramienta valiosa para investigar eventos aguas arriba durante el desarrollo de inflamación local impulsada por una respuesta inmune continua²¹. El protocolo actual describe la inflamación de la superficie ocular acompañada de DGM obstructiva. En este método, los ratones son inmunizados y, después de 2 semanas, desafiados en la superficie ocular con el inmunógeno durante 7 días. Además, se describen los pasos para aislar el exudado ocular y los órganos oculares asociados durante la inflamación aguda y la disección de la córnea, la conjuntiva y los párpados.