Indução da inflamação da superfície ocular e coleta de tecidos envolvidos

Cada piscar de olhos reabastece o filme lacrimal liso disperso sobre a córnea. Os epitélios da superfície ocular facilitam a distribuição e a orientação correta do filme lacrimal na superfície ocular. As mucinas são fornecidas pelas células epiteliais da córnea e da conjuntiva para ajudar a posicionar a parte aquosa do filme lacrimal proveniente das glândulas lacrimais na superfície dos olhos. Finalmente, a MG secreta lipídios que criam uma camada de cobertura que impede a evaporação da parte aquosa do filme lacrimal ^1,2,3. Desta forma, as funções coordenadas de todos os órgãos oculares protegem a superfície ocular de patógenos invasores ou lesões e suportam a visão cristalina sem qualquer dor ou desconforto.

Em uma superfície ocular saudável, a descarga ocular que flui ou o reum ocular varre a poeira, as células epiteliais mortas, as bactérias, o muco e as células imunes. Armadilhas extracelulares de neutrófilos agregados (aggNETs) formulam uma matriz em forma de malha composta de cromatina extracelular e incorporam esses componentes no reum ocular. Os AggNETs resolvem a inflamação pela degradação proteolítica de citocinas pró-inflamatórias e quimiocinas⁴. No entanto, quando se tornam disfuncionais, esses aggNETs aberrantes impulsionam a patogênese de doenças como oclusões vasculares na COVID-19⁵, cálculos biliares⁶ e sialolitíase⁷. Da mesma forma, os aggNETs na superfície ocular desempenham um papel protetor e contribuem para a resolução da inflamação da superfície altamente exposta⁸. Uma formação exagerada ou a falta de aggNETs na superfície ocular pode prejudicar a estabilidade do filme lacrimal e/ou causar feridas na córnea, conjuntivite cicatrizante e doença do olho seco. Por exemplo, a obstrução da MG é uma das principais causas de doença do olho seco⁹. AggNETs também são conhecidos por obstruir o fluxo de secreção lipídica dos ductos de MG e causar disfunção da glândula meibomiana (MGD). A congestão dos orifícios de MG por aggNETs causa falta de fluido gorduroso envolvendo a superfície ocular e fluido engarrafado retrógrado, resultando em disfunção da função da glândula e danos acinares. Essa disfunção pode resultar em evaporação do filme lacrimal, fibrose das margens das pálpebras, inflamação ocular e dano prejudicial à MG^10,11.

Vários modelos animais foram desenvolvidos ao longo dos anos para imitar o processo patológico da MGD em humanos. Por exemplo, camundongos C57BL/6 com 1 ano de idade ajudaram a estudar os efeitos relacionados à idade na doença do olho seco (DED) e MGD, refletindo a patologia da doença ocular em pacientes com 50 anos ou mais^12,13,14. Além disso, os coelhos são modelos apropriados para investigar os efeitos das intervenções farmacológicas. Portanto, a indução de MGD em coelhos tem sido relatada pela administração tópica de epinefrina ou pela introdução sistêmica de ácido 13-cis-retinóico (isotretinoína)15,16,17,18,19.

Embora esses modelos animais fossem adequados para determinar os diferentes fatores que contribuem para a fisiopatologia da MGD, eles foram restritos em sua utilização. Por exemplo, o modelo murino de MGD relacionada à idade foi ideal para decifrar elementos apenas em adultos mais velhos e, portanto, os coelhos pareceram ser o modelo animal mais adequado para estudar doenças da superfície ocular, pois permitem a investigação de múltiplos mecanismos fisiopatológicos. No entanto, devido à falta de ferramentas analíticas abrangentes para detectar proteínas na superfície ocular e porque muitas partes do genoma do coelho não são anotadas, elas são limitadas para investigações^20,21.

Além disso, esses modelos animais utilizados para investigar a patogênese da doença do olho seco não forneceram detalhes adequados para analisar o braço imunológico do distúrbio que instiga a inflamação da superfície ocular. Nesse sentido, o modelo murino de MGD desenvolvido por Reyes et al. mostrou associação entre doença ocular alérgica em camundongos e MGD em humanos e destacou a etiologia imunológica responsável pela MGD obstrutiva²¹. Esse modelo associa a doença alérgica ocular a uma resposta TH17 que recruta neutrófilos para a conjuntiva e pálpebra, causando MGD e inflamação ocular crônica²¹. A indução de MGD e inflamação ocular neste modelo murino é uma ferramenta valiosa para investigar eventos a montante durante o desenvolvimento de inflamação local impulsionada por uma resposta imune contínua²¹. O protocolo atual descreve a inflamação da superfície ocular acompanhada de MGD obstrutiva. Neste método, os ratos são imunizados e, após 2 semanas, desafiados na superfície ocular com o imunógeno por 7 dias. Além disso, os passos para isolar o exsudato ocular e os órgãos oculares associados durante a inflamação aguda e a dissecção da córnea, conjuntiva e pálpebras são descritos.