Embriões de frango, como modelo de desenvolvimento clássico, são usados em nosso laboratório para avaliar cardiotoxicções de desenvolvimento após a exposição a vários contaminantes ambientais. Métodos de exposição e métodos de avaliação morfológica/funcional estabelecidos estão descritos neste manuscrito.
Embriões de frango são um modelo clássico em estudos de desenvolvimento. Durante o desenvolvimento de embriões de frango, a janela de tempo do desenvolvimento cardíaco é bem definida, e é relativamente fácil alcançar exposição precisa e oportuna através de múltiplos métodos. Além disso, o processo de desenvolvimento cardíaco em embriões de frango é semelhante aos mamíferos, resultando também em um coração de quatro câmaras, tornando-se um modelo alternativo valioso na avaliação das cardiotoxicções de desenvolvimento. Em nosso laboratório, o modelo de embrião de frango é rotineiramente utilizado na avaliação de cardiotoxicções de desenvolvimento após exposição a diversos poluentes ambientais, incluindo substâncias per e polifluoroalquila (PFAS), material particulado (PMs), escape diesel (DE) e nanoestá materiais. O tempo de exposição pode ser livremente selecionado com base na necessidade, desde o início do desenvolvimento (dia embrionário 0, ED0) até o dia anterior ao eclosão. Os principais métodos de exposição incluem injeção de células de ar, microinjeção direta e inalação de células de ar (originalmente desenvolvidas em nosso laboratório), e os pontos finais disponíveis atualmente incluem função cardíaca (eletrocardiografia), morfologia (avaliações histológicas) e avaliações biológicas moleculares (imunohistoquímica, qRT-PCR, mancha ocidental, etc.). É claro que o modelo de embrião de frango tem suas próprias limitações, como a disponibilidade limitada de anticorpos. No entanto, com mais laboratórios começando a utilizar esse modelo, ele pode ser usado para fazer contribuições significativas para o estudo das cardiotoxicções do desenvolvimento.
O embrião de frango é um modelo clássico de desenvolvimento, que tem sido usado por mais de duzentos anos1. O modelo de embrião de frango tem várias vantagens em relação aos modelos tradicionais. Em primeiro lugar, já há mais de 70 anos, o desenvolvimento normal do embrião de frango havia sido ilustrado muito claramente no guia de estadiamento hamburger-hamilton2, no qual foram definidos um total de 46 estágios durante o desenvolvimento de embriões de frango com tempo preciso e características morfológicas, facilitando detecções de desenvolvimento anormal. Além disso, o modelo de embrião de frango tem outras características, como ser relativamente de baixo custo e redundante em quantidade, controles relativamente precisos de dose de exposição, um sistema independente e fechado dentro da concha e fácil manipulação do embrião em desenvolvimento, o que garante seu potencial de ser usado como um poderoso modelo de avaliação toxicológica.
Na cardiotoxicidade, o embrião de frango apresenta um coração de quatro câmaras, semelhante aos corações de mamíferos, mas com paredes mais grossas, permitindo avaliações morfológicas mais fáceis. Além disso, o embrião de frango permite a exposição à inalação de desenvolvimento, o que não é possível em modelos de mamíferos: durante o estágio posterior de desenvolvimento, o embrião de frango passará da respiração interna para a respiração externa (obtendo oxigênio através do pulmão); Este último requer que o embrião penetre a membrana celular de ar com o bico, e começa a respirar ar3, tornando a célula de ar uma mini-câmara de inalação. Utilizando esse fenômeno, os efeitos toxicológicos dos contaminantes gasosos no coração (e em outros órgãos) podem ser avaliados sem a necessidade de instrumentos dedicados de câmara de inalação.
Neste manuscrito, são descritos vários métodos de avaliação de exposição/ponto final, todos os quais servem para tornar o embrião de frango uma ferramenta poderosa na avaliação da cardiotoxicidade do desenvolvimento após a exposição a contaminantes ambientais.
O embrião de frango é um modelo clássico em estudos de desenvolvimento há 200 anos1. Nossos métodos apresentados neste manuscrito têm sido utilizados na avaliação de diversos contaminantes ambientais, incluindo ácido perfluorooctanóico, material particulado e escapamento diesel com sucesso5,7,8,9,10,<sup class="xref…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciência Natural da China (Grant No. 91643203, 91543208, 81502835).
4% phosphate buffered formaldehydefixative | Biosharp, Hefei, China | REF: BL539A | |
75% ethanol | Guoyao,Shanghai,China | CAS:64-17-5 | |
Biosignaling monitor BL-420E+ | Taimeng, Chengdu, China | BL-420E+ | |
Candling lamp | Zhenwei, Dezhou, China | WZ-001 | |
Disposable syringe | Zhiyu, Jiangsu, China | ||
Egg incubator | Keyu,Dezhou, China | KFX | |
Electrical balance | OHAUS, Shanghai, China | AR 224CN | |
Electro-thermal incubator | Shenxian, Shanghai, China | DHP-9022 | |
Ethanol absolute | Guoyao,Shanghai,China | CAS:64-17-5 | |
Fertile chicken egg | Jianuo, Jining, China | ||
Hematoxylin and Eosin Staining Kit | Beyotime, Bejing, China | C0105 | |
Histology paraffin | Aladdin, Shanghai, China | P100928-500g | Melt point 52~54°C |
Histology paraffin | Aladdin, Shanghai, China | P100936-500g | Melt point 62~64°C |
IV catheter | KDL, Zhejiang, China | The catheters have to be soft, plastic ones. | |
Lentivirus | Genechem, Shanghai, China | The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem. | |
Masson's trichrome staining kit | Solarbio, Beijing, China | G1340 | |
Metal probe | Jinuotai, Beijing, China | ||
Microinjector (5 uL) | Anting,Shanghai, China | ||
Microscope | CAIKON, Shanghai, China | XSP-500 | |
Microtome | Leica, Germany | HistoCore BIOCUT | |
Microtome blade | Leica,Germany | Leica 819 | |
Pentobarbitual sodium | Yitai Technology Co. Ltd., Wuhan, China | CAS: 57-33-0 | |
Pipetter(10ul) | Sartorius, Germany | ||
Povidone iodide | Longyuquan, Taian, China | ||
Scissor | Anqisheng,Suzhou, China | ||
Sterile saline | Kelun,Chengdu, China | ||
Sunflower oil | Mighty Jiage, Jiangsu, China | Any commerical sunflower oil for human consumption should work | |
Tape | M&G, Shanghai, China | ||
Tedlar PVF Bag (5L) | Delin, Dalian, China | ||
Vortex mixer | SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US | MX-F | |
Xylene | Guoyao,Shanghai,China | CAS:1330-20-7 |