Summary

Использование куриного эмбриона в качестве мощного инструмента в оценке кардиотоксицитов развития

Published: March 21, 2021
doi:

Summary

Куриные эмбрионы, как классическая модель развития, используются в нашей лаборатории для оценки кардиотоксицности развития после воздействия различных загрязнителей окружающей среды. В данной рукописи описаны методы воздействия и установленные методы морфологической/функциональной оценки.

Abstract

Куриные эмбрионы являются классической моделью в исследованиях развития. Во время развития куриных эмбрионов временное окно развития сердца четко определено, и относительно легко достичь точного и своевременного воздействия с помощью нескольких методов. Кроме того, процесс развития сердца у куриных эмбрионов аналогичен млекопитающим, что также приводит к четырехкамерному сердцу, что делает его ценной альтернативной моделью в оценке кардиотоксицитов развития. В нашей лаборатории модель куриного эмбриона обычно используется для оценки кардиотоксичности развития после воздействия различных загрязнителей окружающей среды, включая пер- и полифторалкильные вещества (PFAS), твердые частицы (PMs), дизельные выхлопные газы (DE) и наноматериалы. Время воздействия может быть свободно выбрано в зависимости от необходимости, от начала развития (эмбриональный день 0, ЭД0) до дня, предшествуя вылуплению. Основные методы воздействия включают инъекцию воздушных клеток, прямую микроинъекцию и вдыхание воздушных клеток (первоначально разработанные в нашей лаборатории), а доступные в настоящее время конечные точки включают сердечную функцию (электрокардиография), морфологию (гистологические оценки) и молекулярно-биологические оценки (иммуногистохимия, qRT-ПЦР, вестерн-блоттинг и т. Д.). Конечно, модель куриного эмбриона имеет свои ограничения, такие как ограниченная доступность антител. Тем не менее, поскольку все больше лабораторий начинают использовать эту модель, она может быть использована для внесения значительного вклада в изучение кардиотоксицитов развития.

Introduction

Куриный эмбрион является классической моделью развития, которая используется уже более двухсот лет1. Модель куриного эмбриона имеет различные преимущества по сравнению с традиционными моделями. Прежде всего, еще более 70 лет назад нормальное развитие куриного эмбриона было очень четко проиллюстрировано в руководстве по постановке Гамбургера-Гамильтона2,в котором в общей сложности 46 стадий развития куриного эмбриона были определены с точным временем и морфологическими характеристиками, облегчающими обнаружение аномального развития. Кроме того, модель куриного эмбриона имеет и другие особенности, такие как относительно низкая стоимость и избыточность по количеству, относительно точный контроль дозы воздействия, независимая, закрытая система внутри оболочки и легкое манипулирование развивающимся эмбрионом, что гарантирует его потенциал для использования в качестве мощной токсикологической модели оценки.

При кардиотоксичности куриный эмбрион имеет четырехкамерное сердце, похожее на сердца млекопитающих, но с более толстыми стенками, что позволяет легче проводить морфологические оценки. Кроме того, куриный эмбрион допускает ингаляционное воздействие на развитие, что невозможно в моделях млекопитающих: на более поздней стадии развития куриный эмбрион перейдет от внутреннего дыхания к внешнему дыханию (получение кислорода через легкие); последний требует, чтобы эмбрион проник через воздушную клеточную мембрану клювом, и начал дышать воздухом3,делая воздушную клетку мини-ингаляционной камерой. Используя это явление, токсикологическое воздействие газовых загрязнителей на сердце (и другие органы) может быть оценено без необходимости использования специальных инструментов ингаляционной камеры.

В этой рукописи описано несколько методов оценки экспозиции/конечных точек, все из которых служат для того, чтобы сделать куриный эмбрион мощным инструментом в оценке кардиотоксичности развития после воздействия загрязнителей окружающей среды.

Protocol

Все описанные процедуры были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) Университета Циндао. В нашей лаборатории яйца инкубировали в двух инкубаторах. Яйца держали вертикально в инкубаторе и случайным образом размещали на полках. Условия инкуб?…

Representative Results

Результаты экспозицииИнъекция воздушных клетокИнъекция воздушных клеток может эффективно подвергать развивающиеся куриные эмбрионы воздействию различных агентов, которые впоследствии могут быть обнаружены в собранных образцах (сыворотка, ткань и т. д.) эмбрионов / птенцов цыпля…

Discussion

Куриный эмбрион был классической моделью в исследованиях развития в течение 200 лет1. Наши методы, представленные в этой рукописи, были использованы при оценке нескольких загрязнителей окружающей среды, включая перфтороктановую кислоту, твердые частицы и дизельные выхлопн…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (грант No 91643203, 91543208, 81502835).

Materials

4% phosphate buffered formaldehydefixative Biosharp, Hefei, China REF: BL539A
75% ethanol Guoyao,Shanghai,China CAS:64-17-5
Biosignaling monitor BL-420E+ Taimeng, Chengdu, China BL-420E+
Candling lamp Zhenwei, Dezhou, China WZ-001
Disposable syringe Zhiyu, Jiangsu, China
Egg incubator Keyu,Dezhou, China KFX
Electrical balance OHAUS, Shanghai, China AR 224CN
Electro-thermal incubator Shenxian, Shanghai, China DHP-9022
Ethanol absolute Guoyao,Shanghai,China CAS:64-17-5
Fertile chicken egg Jianuo, Jining, China
Hematoxylin and Eosin Staining Kit Beyotime, Bejing, China C0105
Histology paraffin Aladdin, Shanghai, China P100928-500g Melt point 52~54°C
Histology paraffin Aladdin, Shanghai, China P100936-500g Melt point 62~64°C
IV catheter KDL, Zhejiang, China The catheters have to be soft, plastic ones.
Lentivirus Genechem, Shanghai, China The lentivirus were individually designed/synthesized by Genechem.
Masson's trichrome staining kit Solarbio, Beijing, China G1340
Metal probe Jinuotai, Beijing, China
Microinjector (5 uL) Anting,Shanghai, China
Microscope CAIKON, Shanghai, China XSP-500
Microtome Leica, Germany HistoCore BIOCUT
Microtome blade Leica,Germany Leica 819
Pentobarbitual sodium Yitai Technology Co. Ltd.,  Wuhan, China CAS: 57-33-0
Pipetter(10ul) Sartorius, Germany
Povidone iodide Longyuquan, Taian, China
Scissor Anqisheng,Suzhou, China
Sterile saline Kelun,Chengdu, China
Sunflower oil Mighty Jiage, Jiangsu, China Any commerical sunflower oil for human consumption should work
Tape M&G, Shanghai, China
Tedlar PVF Bag (5L) Delin, Dalian, China
Vortex mixer SCILOGEX, Rocky Hill, CT, US MX-F
Xylene Guoyao,Shanghai,China CAS:1330-20-7

References

  1. Kain, K. H., et al. The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research. Developmental Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).
  2. Menna, T. M., Mortola, J. P. Effects of posture on the respiratory mechanics of the chick embryo. Journal of Experimental Zoology. 293 (5), 450-455 (2002).
  3. Hamburger, V., Hamilton, H. L. A series of normal stages in the development of the chick embryo. Journal of Morphology. 88 (1), 49-92 (1951).
  4. Yamamoto, F. Y., Neto, F. F., Freitas, P. F., Oliveira Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. Cadmium effects on early development of chick embryos. Environmental Toxicology and Pharmacology. 34 (2), 548-555 (2012).
  5. Lv, N., et al. The roles of bone morphogenetic protein 2 in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection. Toxicology and Applied Pharmacology. 352, 68-76 (2018).
  6. Kmecick, M., Vieira da Costa, M. C., Oliveria Ribeiro, C. A., Ortolani-Machado, C. F. Morphological evidence of neurotoxic effects in chicken embryos after exposure to perfluorooctanoic acid (PFOA) and inorganic cadmium. Toxicology. 4227, 152286 (2019).
  7. Jiang, Q., Lust, R. M., Strynar, M. J., Dagnino, S., DeWitt, J. C. Perflurooctanoic acid induces developmental cardiotoxicity in chicken embryos and hatchlings. Toxicology. 293 (1-3), 97-106 (2012).
  8. Jiang, Q., et al. In ovo very early-in-life exposure to diesel exhaust induced cardiopulmonary toxicity in a hatchling chick model. Environmental Pollution. 264, 114718 (2020).
  9. Jiang, Q., Lust, R. M., DeWitt, J. C. Perfluorooctanoic acid induced-developmental cardiotoxicity: are peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPARalpha) and bone morphorgenic protein 2 (BMP2) pathways involved. Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A. 76 (11), 635-650 (2013).
  10. Jiang, Q., et al. Changes in the levels of l-carnitine, acetyl-l-carnitine and propionyl-l-carnitine are involved in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity in chicken embryo. Environmental Toxicology and Pharmacology. 48, 116-124 (2016).
  11. Zhao, M., et al. The role of PPAR alpha in perfluorooctanoic acid induced developmental cardiotoxicity and l-carnitine mediated protection-Results of in ovo gene silencing. Environmental Toxicology and Pharmacology. 56, 136-144 (2017).
  12. Jiang, Q., et al. Particulate Matter 2.5 Induced Developmental Cardiotoxicity in Chicken Embryo and Hatchling. Front Pharmacol. 11, 841 (2020).
  13. Molina, E. D., et al. Effects of air cell injection of perfluorooctane sulfonate before incubation on development of the white leghorn chicken (Gallus domesticus) embryo. Environmental Toxicology and Chemistry. 25 (1), 227-232 (2006).
  14. Crump, D., Chiu, S., Williams, K. L. Bis-(3-allyl-4-hydroxyphenyl) sulfone decreases embryonic viability and alters hepatic mRNA expression at two distinct developmental stages in chicken embryos exposed via egg injection. Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (2), 530-537 (2018).
  15. Franci, C. D., et al. Potency of polycyclic aromatic hydrocarbons in chicken and Japanese quail embryos. Environmental Toxicology and Chemistry. 37 (6), 1556-1564 (2018).
  16. Rand, M. D., et al. Developmental exposure to methylmercury and resultant muscle mercury accumulation and adult motor deficits in mice. Neurotoxicology. 81, 1-10 (2020).
  17. Tanaka, T., Suzuki, T., Inomata, A., Moriyasu, T. Combined effects of maternal exposure to fungicides on behavioral development in F1 -generation mice: 2. Fixed-dose study of thiabendazole. Birth Defects Research. , (2020).
  18. Kofman, O., Lan, A., Raykin, E., Zega, K., Brodski, C. Developmental and social deficits and enhanced sensitivity to prenatal chlorpyrifos in PON1-/- mouse pups and adults. PLoS One. 15 (9), 0239738 (2020).
  19. Kischel, A., Audouard, C., Fawal, M. A., Davy, A. Ephrin-B2 paces neuronal production in the developing neocortex. BMC Developmental Biology. 20 (1), 12 (2020).
  20. Okolo, F., Zhang, G., Rhodes, J., Gittes, G. K., Potoka, D. A. Intra-Amniotic Sildenafil Treatment Promotes Lung Growth and Attenuates Vascular Remodeling in an Experimental Model of Congenital Diaphragmatic Hernia. Fetal Diagnosis and Therapy. , 1-13 (2020).
  21. Vyslouzil, J., et al. Subchronic continuous inhalation exposure to zinc oxide nanoparticles induces pulmonary cell response in mice. Journal of Trace Elements in Medicine and Biology. 61, 126511 (2020).
  22. Wahle, T., et al. Evaluation of neurological effects of cerium dioxide nanoparticles doped with different amounts of zirconium following inhalation exposure in mouse models of Alzheimer’s and vascular disease. Neurochemistry International. 138, 104755 (2020).
  23. Tanabe, K. Three-Dimensional Echocardiography- Role in Clinical Practice and Future Directions. Circ J. 84 (7), 1047-1054 (2020).

Play Video

Cite This Article
Jiang, Q., Xu, X., DeWitt, J. C., Zheng, Y. Using Chicken Embryo as a Powerful Tool in Assessment of Developmental Cardiotoxicities. J. Vis. Exp. (169), e62189, doi:10.3791/62189 (2021).

View Video