在活体钙成像小鼠致病性甘里昂神经元对味觉刺激的反应

哺乳动物外周味系统的一个关键组成部分是原生结石。除了一些内侧的耳塞神经元外，基因还包括前舌和味觉内侧阵阵神经元的细胞体。与其他外周感觉神经元类似，原生结核神经元是伪单极神经元，长轴向外周投射到味蕾，并集中投射到孤独道¹的脑干核。这些神经元主要通过味觉受体细胞释放ATP来激活，这些受体细胞对口腔中的味道刺激有反应^。。。ATP是味觉信号的基本神经递质，阵风结石神经元表达的P2rx受体是激活4的必要^条件。鉴于味觉受体细胞表达特定味觉受体的特定味觉模式（甜，苦，咸，乌玛米，或酸），它已被假设，阵风结石神经元的反应，味道刺激也将勉强调整^5。

整个神经记录显示，和弦丁帕尼和更大的上级石油神经进行阵风信号代表所有五种口味模式的原生结石^6，7。然而，这仍然留下了关于神经元对给定味道的反应的特异性的问题：如果有味道模式特定的神经元，多模式神经元，或两者的混合物。单纤维记录提供了有关单个纤维的活动及其化学敏感性的更多信息 8，9，^10，但这种方法仅限于从少量纤维收集数据。同样，在个体大鼠的活体电生理记录中，生成结石神经元提供了有关单个神经元11、12、13的反应的信息，但仍丧失了种群的活性，每只动物的神经元记录相对较少。为了分析神经元合奏的反应模式，而不忽视单个神经元的活性，需要采用新技术。

钙成像，特别是使用基因编码的钙指标，如GCaMP，提供了这一技术突破14，15，16，17，18。GCaMP使用钙作为神经元活性的代名词，随着细胞内钙含量的升高，绿色荧光增加。继续开发新的GCaMP形式，以提高信号与噪声比，调整绑定动力学，并适应专业实验^19。GCaMP 提供单个神经元分辨率，与整个神经记录不同，可以同时测量神经元组合的反应，不像单个纤维或单个细胞记录。基因结胶的钙成像已经提供了关于野生型小鼠^16、20中这些神经元的调谐特征的重要信息，并已识别出基因操纵小鼠¹⁸中的外周味错配表型。

在活体钙成像技术中应用到基因结石中的一个主要困难是，它被封装在骨质的暴躁牛皮中。为了获得光学访问基因，需要精密的手术，以去除骨层，同时保持结节完好无损。为此，我们创建了此指南，以帮助其他研究人员访问基因结石，并成像这些神经元的 GCaMP 介导荧光反应，以品尝体内的刺激。