Summary

İplik Embolisi Yöntemi ile Üstün Sagittal-Sinüs Oklüzyonunun Sıçan Modelinin Kurulması

Published: July 04, 2021
doi:

Summary

Burada, iplik embolizasyon yöntemiyle üstün sagittal sinüs (SSS) trombozunun Sprague-Dawley (SD) sıçan modeli romanı kurduk ve modelin stabilitesi ve güvenilirliği doğrulandı.

Abstract

Serebral venöz sinüs trombozunun (CVST) doğal başlangıcına katkıda bulunan mekanizmalar çoğunlukla bilinmemektedir ve hastalığın seyrinde kontrol edilemeyen çeşitli faktörler söz konusudur ve bu da klinik araştırmalarda büyük sınırlamalara neden olur. Bu nedenle, çeşitli kontrol edilemeyen kafa karıştırıcı faktörleri standartlaştırabilecek istikrarlı CVST hayvan modellerinin kurulması, klinik araştırmalardaki eksikliklerin giderilmesine yardımcı oldu. Son yıllarda, çeşitli CVST hayvan modelleri inşa edilmiştir, ancak bu modellere dayanan sonuçlar tutarsız ve eksik olmuştur. Bu nedenle, CVST’nin patofizyolojik mekanizmalarını daha fazla araştırmak için, CVST’nin tanı ve tedavisi için önemli pratik değere ve bilimsel öneme sahip yeni ve son derece uyumlu bir hayvan modeli oluşturmak gerekir. Bu çalışmada, iplik embolizasyon yöntemi ile üstün sagittal sinüs (SSS) trombozunun Sprague-Dawley (SD) sıçan modeli adlı bir roman kurulmuş ve modelin stabilitesi ve güvenilirliği doğrulanmıştır. Ek olarak, CVST oluşumundan sonra sıçanlarda serebral venöz kan akışındaki değişiklikleri değerlendirdik. Toplu olarak, SD-rat SSS-tromboz modeli kolayca kurulan, travmayı en aza indiren, iyi stabilite sağlayan ve iskemik zamanlama ve konumu doğru bir şekilde kontrol etmeyi sağlayan yeni bir CVST hayvan modelini temsil eder.

Introduction

Serebral venöz sinüs trombozu (CVST), tüm inme nedenlerinin sadece% 0.5-1.0’ini oluşturan ancak çocuklarda ve genç yetişkinlerde nispeten yüksek bir oluşum oranına sahip olan serebral venöz sistemin nadir bir hastalığıdır1. Otopsi sırasında SEREBROVASKÜLER hastalık ölümlerinin %10’unun nedeni CVST bulunmuştur2. Tromboz intrakraniyal venöz sistemin herhangi bir bölümünde ortaya çıkabilir. Üstün sagittal sinüs (SSS), CVST’de en sık etkilenen bölgelerden biridir ve birden fazla kan damarını içerebilir. Venöz sinüslerin darlığı veya tıkanması nedeniyle, genellikle artan intrakraniyal basınç3ile birlikte intrakraniyal venöz geri dönüş engellenir. CVST’nin klinik bulguları karmaşıktır ve zamanla değişir; semptomların özgüllüğü eksikliği olmasına rağmen, en sık görülen semptomlar baş ağrısı (%77,2), nöbetler (%42,7) ve nörolojik eksiklikler (%39,9) arasındadır. Ciddi vakalarda koma ve hatta ölüm meydana gelebilir4,5. Son yıllarda, tıp ve sağlık standartlarının genel olarak iyileştirilmesi ve halk sağlığı farkındalığı nedeniyle, ilgili risk faktörlerinin oranı değişmiş, travma ve enfeksiyon oranı azalmış ve hamilelik, puerperium, oral kontraseptifler ve diğer nedenlerden kaynaklanan CVST oranı giderek artmıştır5.

Şu anda, CVST patogenez hala iyi anlaşılamamıştır. CVST’yi derinlemesine keşfetmek için daha fazla patofizyolojik araştırmaya ihtiyaç vardır. Bununla birlikte, bu araştırma yöntemlerinin çoğu invazivdir ve bu nedenle klinik olarak uygulanması zordur. Klinik araştırmaların birçok sınırlaması nedeniyle, hayvan modelleri temel ve çevirisel araştırmalar açısından yeri doldurulamaz avantajlara sahiptir.

CVST’nin nedeni karmaşıktır, çünkü ilk başlangıcı genellikle tanınmaz ve trombüs oluşumunun yeri oldukça değişkendir. Neyse ki, hayvan modelleri bu faktörlerin daha iyi kontrolünü sağlayabilir. Son birkaç on yılda, çeşitli CVST hayvan modelleri kuruldu ve her modelin kendi dezavantajları var. Farklı üretim yöntemlerine göre, kabaca aşağıdaki kategorilere ayrılabilirler: basit SSS-ligasyon modeli6,7; SSS dahili enjeksiyon hızlandırıcı modeli8; ferrik-klorür kaynaklı SSS tromboz modeli9; fotokimyasal kaynaklı SSS tromboz modeli10; ve kendi kendine yapılan emboli-tıkanıklık SSS model11. Bununla birlikte, bu modellerin çoğu hayvanın serebral korteksinde invaziv hasarı atlatamaz ve iskemik zamanı ve yeri doğru bir şekilde kontrol edemez. Bazı modellerde trombüs kendiliğinden yeniden canlanacaktır; diğer modellerde, SSS kalıcı olarak tıkanır. Ayrıca bu modellerde komplike operasyonlar ve/veya ciddi yaralanmalar sonraki patofizyolojik bulguları etkileyebilir.

Bu çalışmada, hasarı en aza indiren, hassas kontrol edilebilirliği sağlayan ve iyi stabilite sağlayan bir CVST modelini başarıyla oluşturmak için Sprague-Dawley (SD) sıçanlarının SSS’sine bir diş fişi yerleştirilmiştir. Ayrıca, modelin etkinliğini doğrulamak için küçük hayvan manyetik rezonans görüntüleme (MRG) ve lazer benekli kan akışı görüntülemesi birleştirildi. Modelimizin kurulmasından önce ve sonra serebral kan akışındaki değişiklikleri değerlendirdik ve modelimizin stabilitesini değerlendirdik, CVST’nin oluşumunu, gelişimini ve ilgili patofizyolojik mekanizmalarını araştıran daha fazla çalışma için bir temel attık.

Protocol

Hayvan konularını içeren prosedürler Wenzhou Tıp Üniversitesi Tıbbi Normlar ve Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır ve laboratuvar hayvanlarının kullanımı ve bakımı ile ilgili Çin mevzuatına uygundur. 1. Diş fişinin, SD sıçanların ve deneysel ekipmanın hazırlanması Diş fişinin ana gövdesi olarak 0,28 mm çapında bir naylon iplik kullanın.NOT: Naylon ipliğin yumuşaklığı ve sertliği orta olmalıdır. Naylon ipliğin bir ucunu siliko…

Representative Results

Dikiş yöntemi ile SD-sıçan SSS-tromboz modelini kurmak için dikiş önceden hazırlanmalıdır (Şekil 1A) ve deney için gerekli ekipman (Şekil 1B) hazırlanmalıdır. Operasyonun hassas doğası nedeniyle, modelin hazırlanmasının bir diseksiyon mikroskobu altında tamamlanması gerekir. Ana adımlar Şekil 2’de gösterilmiştir. Modelin kan akışı gözleminin belirli ayrıntılarının açıklamasını kolaylaştırmak …

Discussion

Bu çalışmada, SD sıçanların SSS’sine kendi kendine yapılmış bir diş fişi takılarak yeni bir CVST modeli türü başarıyla oluşturulmuştur. Ayrıca, lazer benekli kan akışı görüntüleme ve küçük hayvan MRG’si, iskemik zamanlama ve konumu standartlaştırmak için embolizasyondan önce ve sonra SD sıçanlarının beyin yüzeyindeki kan akışındaki değişiklikleri izlemek için birleştirildi.

1989 yılında Longa ve arkadaşları, sıçanların dış karotis arterine k…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma, Fujian Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi (X2019002-talents) Üst Düzey Yetenekler için Grant Bilimsel Araştırma Vakfı tarafından desteklendi.

Materials

2 mL syringe Becton,Dickinson and Company 301940
brain stereotaxic instrument Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd 68025
dissecting microscope Wuhan SIM Opto-technology Co. SIM BFI-HR PRO
high-speed skull drill Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd 78046
laser-speckle blood-flow imaging system Wuhan SIM Opto-technology Co. SIM BFI-HR PRO
needle holder Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F31022-12
needle thread Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F33303-08
scissors Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd S13029-14
silica gel Heraeus Kulzer 302785
small animal anesthesia machine Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd R540
small-animal MRI Bruker Medical GmbH Biospec 94/30 USR
tweezers Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F11029-11
vascular forceps Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F22003-09

References

  1. Bousser, M. G., Ferro, J. M. Cerebral venous thrombosis: an update. Lancet Neurology. 6 (2), 162-170 (2007).
  2. Guenther, G., Arauz, A. Cerebral venous thrombosis: A diagnostic and treatment update. Neurologia. 26 (8), 488-498 (2011).
  3. Stam, J. Thrombosis of the cerebral veins and sinuses. New England Journal of Medicine. 352 (17), 1791-1798 (2005).
  4. Einhäupl, K., et al. EFNS guideline on the treatment of cerebral venous and sinus thrombosis in adult patients. European Journal of Neurology. 17 (10), 1229-1235 (2010).
  5. Coutinho, J. M., Zuurbier, S. M., Stam, J. Declining mortality in cerebral venous thrombosis: a systematic review. Stroke. 45 (5), 1338-1341 (2014).
  6. Gotoh, M., Ohmoto, T., Kuyama, H. Experimental study of venous circulatory disturbance by dural sinus occlusion. Acta Neurochir (Wien). 124 (2-4), 120-126 (1993).
  7. Miyamoto, K., Heimann, A., Kempski, O. Microcirculatory alterations in a mongolian gerbil sinus-vein thrombosis model. Journal of Clinical Neuroscience. 8 (4), (2001).
  8. Ungersböck, K., Heimann, A., Kempski, a. O. Cerebral Blood Flow Alterations in a Rat Model of Cerebral Sinus Thrombosis. Stroke. 24 (4), (1993).
  9. Röttger, C., et al. A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes. Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).
  10. Chen, C., et al. Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis. Neuroscience. 306, 39-49 (2015).
  11. Yang, H., Meng, Z., Zhang, C., Zhang, P., Wang, Q. Establishing a new rat model of central venous sinus thrombosis and analyzing its pathophysiological and apoptotic changes. Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 130-135 (2012).
  12. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  13. Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).
  14. Wang, E., et al. Mapping tissue pH in an experimental model of acute stroke – Determination of graded regional tissue pH changes with non-invasive quantitative amide proton transfer MRI. Neuroimage. 191, (2019).
  15. Liu, C., et al. Identification of Vigilin as a Potential Ischemia Biomarker by Brain Slice-Based Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment. Analytical Chemistry. 91 (10), 6675-6681 (2019).

Play Video

Cite This Article
Jiang, W., Jin, C., Xu, W., Li, Y., Lin, Y., Liang, S., Wang, W. Establishment of a Rat Model of Superior Sagittal-Sinus Occlusion via a Thread-Embolism Method. J. Vis. Exp. (173), e62118, doi:10.3791/62118 (2021).

View Video