Summary

Establecimiento De Un Modelo De Rata De La Oclusión Superior Sagital-Seno A Través De Un Método De Hilo-Embolia

Published: July 04, 2021
doi:

Summary

Aquí, establecemos un modelo nuevo de la rata de Sprague-Dawley (SD) de la trombosis sagital superior del sino (SSS) vía un método del hilo-embolization, y la estabilidad y la confiabilidad del modelo fueron verificadas.

Abstract

Los mecanismos que contribuyen al inicio natural de la trombosis cerebral del sino venoso (CVST) son sobre todo desconocidos, y una variedad de factores incontrolables están implicados en el curso de la enfermedad, dando por resultado grandes limitaciones en la investigación clínica. Por lo tanto, el establecimiento de modelos animales CVST estables que pueden estandarizar una variedad de factores de confusión incontrolables han ayudado a evitar las deficiencias en la investigación clínica. En las últimas décadas, se han construido una variedad de modelos animales CVST, pero los resultados basados en estos modelos han sido inconsistentes e incompletos. Por lo tanto, para explorar más lejos los mecanismos patofisiológicos de CVST, es necesario establecer un modelo animal nuevo y altamente compatible, que tenga valor práctico importante y significación científica para la diagnosis y el tratamiento de CVST. En el actual estudio, un modelo nuevo de la rata de Sprague-Dawley (SD) de la trombosis sagital superior del sino (SSS) fue establecido vía un método del hilo-embolization, y la estabilidad y la confiabilidad del modelo fueron verificadas. Además, evaluamos cambios en flujo de sangre venoso cerebral en ratas después de la formación de CVST. Colectivamente, el modelo de la SSS-trombosis de la SD-rata representa un modelo animal nuevo de CVST que se establezca fácilmente, minimice trauma, rinde buena estabilidad, y permite controlar exactamente la sincronización y la localización isquémicas.

Introduction

La trombosis del seno venoso cerebral (CVST) es una enfermedad rara del sistema venoso cerebral que representa sólo el 0,5-1,0% de todas las causas de accidente cerebrovascular, pero tiene una tasa de ocurrencia relativamente alta en niños y adultos jóvenes1. Durante la autopsia, cvst fue encontrado para ser la causa del 10% de muertes de la enfermedad cerebrovascular2. La trombosis puede ocurrir en cualquier parte del sistema venoso intracraneal. El sino sagital superior (SSS) es una de las áreas lo más comúnmente posible afectadas de CVST y puede implicar los vasos sanguíneos múltiples. Debido a la estenosis u oclusión de los senos venosos, se bloquea el retorno venoso intracraneal, lo que a menudo se acompaña de un aumento de la presión intracraneal3. Las manifestaciones clínicas de CVST son complejas y varían en un plazo determinado; aunque hay una falta de especificidad de los síntomas, los síntomas más comunes incluyen dolor de cabeza (77,2%), convulsiones (42,7%), y déficits neurológicos (39,9%). En casos graves, puede ocurrir coma e incluso la muerte4,5. En los últimos años, debido a la mejora general de las normas médicas y de salud y a la concienciación sobre la salud pública, la proporción de factores de riesgo relacionados ha cambiado, la proporción de traumatismos e infecciones ha disminuido, y la proporción de CVST causada por el embarazo, el puerperio, los anticonceptivos orales y otras razones ha aumentado gradualmente5.

Actualmente, la patogenesia de CVST todavía no se entiende bien. Para explorar CVST en profundidad, se necesita más investigación fisiopatológica. Sin embargo, la mayoría de estos métodos de investigación son invasivos y, por lo tanto, difíciles de implementar clínicamente. Debido a muchas limitaciones de la investigación clínica, los modelos animales tienen ventajas insustituibles en términos de investigación básica y traslacional.

La causa de CVST es compleja, pues su inicio es a menudo desconocido y la localización de la formación del trombo es altamente variable. Afortunadamente, los modelos animales pueden lograr un mejor control de estos factores. En las últimas décadas, se ha establecido una variedad de modelos animales CVST, y cada modelo tiene sus propias desventajas. De acuerdo con los diferentes métodos de producción, se pueden dividir aproximadamente en las siguientes categorías: el modelo simple de ligadura SSS6,7; el acelerador de inyección interna SSS modelo8; la trombosis SSS inducida por cloruro férrico modelo9; la trombosis del SSS fotoquímica inducida por el modelo10; y la embolia-oclusión de auto-oclusión SSS modelo11. Sin embargo, la mayoría de estos modelos son incapaces de evitar el daño invasivo a la corteza cerebral del animal y no son capaces de controlar con precisión el tiempo isquémico y la ubicación. En algunos modelos, el trombo se recanalizará espontáneamente; en otros modelos, el SSS se ocluye permanentemente. Además, las operaciones complicadas y/o lesiones serias pueden afectar a resultados patofisiológicos subsecuentes en estos modelos.

En el actual estudio, un enchufe del hilo fue insertado en el SSS de las ratas de Sprague-Dawley (SD) para establecer con éxito un modelo de CVST que minimizara daño, permitió controlabilidad exacta, y rindió buena estabilidad. Además, la proyección de imagen de resonancia magnética del pequeño-animal (MRI) y la proyección de imagen laser-manchada del sangre-flujo fueron combinadas para verificar la eficacia del modelo. Evaluamos cambios en flujo de sangre cerebral antes y después del establecimiento de nuestro modelo, así como evaluamos la estabilidad de nuestro modelo, sentando una base para otros estudios que exploraban el acontecimiento, el desarrollo, y los mecanismos patofisiológicos relacionados de CVST.

Protocol

Los procedimientos que involucran a sujetos animales han sido aprobados por el Comité de Normas Médicas y Ética de la Universidad de Medicina de Wenzhou y están de acuerdo con la legislación de China sobre el uso y cuidado de animales de laboratorio. 1. Preparación del tapón de rosca, ratas SD y equipos experimentales Utilice una rosca de nylon con un diámetro de 0,28 mm como cuerpo principal del tapón de rosca.NOTA: La suavidad y dureza del hilo de nylon debe ser modera…

Representative Results

Para establecer el modelo de trombosis SSS sd-rata a través del método de sutura, la sutura debe prepararse de antemano (Figura 1A), y el equipo necesario para el experimento (Figura 1B) debe ser preparado. Debido a la naturaleza delicada de la operación, la preparación del modelo debe completarse bajo un microscopio de disección. Los pasos principales se muestran en la Figura 2. Para facilitar la descripción de los detalles e…

Discussion

En este estudio, un nuevo tipo de modelo de CVST fue establecido con éxito insertando un enchufe de rosca hecho a sí mismo en el SSS de ratas SD. Además, la proyección de imagen laser-manchada del sangre-flujo y el pequeño-animal MRI fueron combinados para supervisar cambios en flujo de sangre en la superficie del cerebro de ratas del SD antes y después del embolization para estandardizar la sincronización y la localización isquémicas.

En 1989, Longa et al. hicieron un modelo reversib…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este estudio fue apoyado por la Fundación de Investigación Científica para los Talentos de Alto Nivel de la Universidad de Medicina Tradicional China de Fujian (X2019002-talents).

Materials

2 mL syringe Becton,Dickinson and Company 301940
brain stereotaxic instrument Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd 68025
dissecting microscope Wuhan SIM Opto-technology Co. SIM BFI-HR PRO
high-speed skull drill Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd 78046
laser-speckle blood-flow imaging system Wuhan SIM Opto-technology Co. SIM BFI-HR PRO
needle holder Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F31022-12
needle thread Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F33303-08
scissors Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd S13029-14
silica gel Heraeus Kulzer 302785
small animal anesthesia machine Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd R540
small-animal MRI Bruker Medical GmbH Biospec 94/30 USR
tweezers Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F11029-11
vascular forceps Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd F22003-09

References

  1. Bousser, M. G., Ferro, J. M. Cerebral venous thrombosis: an update. Lancet Neurology. 6 (2), 162-170 (2007).
  2. Guenther, G., Arauz, A. Cerebral venous thrombosis: A diagnostic and treatment update. Neurologia. 26 (8), 488-498 (2011).
  3. Stam, J. Thrombosis of the cerebral veins and sinuses. New England Journal of Medicine. 352 (17), 1791-1798 (2005).
  4. Einhäupl, K., et al. EFNS guideline on the treatment of cerebral venous and sinus thrombosis in adult patients. European Journal of Neurology. 17 (10), 1229-1235 (2010).
  5. Coutinho, J. M., Zuurbier, S. M., Stam, J. Declining mortality in cerebral venous thrombosis: a systematic review. Stroke. 45 (5), 1338-1341 (2014).
  6. Gotoh, M., Ohmoto, T., Kuyama, H. Experimental study of venous circulatory disturbance by dural sinus occlusion. Acta Neurochir (Wien). 124 (2-4), 120-126 (1993).
  7. Miyamoto, K., Heimann, A., Kempski, O. Microcirculatory alterations in a mongolian gerbil sinus-vein thrombosis model. Journal of Clinical Neuroscience. 8 (4), (2001).
  8. Ungersböck, K., Heimann, A., Kempski, a. O. Cerebral Blood Flow Alterations in a Rat Model of Cerebral Sinus Thrombosis. Stroke. 24 (4), (1993).
  9. Röttger, C., et al. A new model of reversible sinus sagittalis superior thrombosis in the rat: magnetic resonance imaging changes. Neurosurgery. 57 (3), 573-580 (2005).
  10. Chen, C., et al. Photothrombosis combined with thrombin injection establishes a rat model of cerebral venous sinus thrombosis. Neuroscience. 306, 39-49 (2015).
  11. Yang, H., Meng, Z., Zhang, C., Zhang, P., Wang, Q. Establishing a new rat model of central venous sinus thrombosis and analyzing its pathophysiological and apoptotic changes. Journal of Neuroscience Methods. 203 (1), 130-135 (2012).
  12. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  13. Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research. Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).
  14. Wang, E., et al. Mapping tissue pH in an experimental model of acute stroke – Determination of graded regional tissue pH changes with non-invasive quantitative amide proton transfer MRI. Neuroimage. 191, (2019).
  15. Liu, C., et al. Identification of Vigilin as a Potential Ischemia Biomarker by Brain Slice-Based Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment. Analytical Chemistry. 91 (10), 6675-6681 (2019).

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Jiang, W., Jin, C., Xu, W., Li, Y., Lin, Y., Liang, S., Wang, W. Establishment of a Rat Model of Superior Sagittal-Sinus Occlusion via a Thread-Embolism Method. J. Vis. Exp. (173), e62118, doi:10.3791/62118 (2021).

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