Modelo de cura da ferida excisional de Murine e Análise de Ferida Morfômica Histológica

A cicatrização de feridas cutâneas é um processo biológico complexo com fases sequencialmente sobrepostas. Requer a coordenação de processos celulares e moleculares que são regulados temporal e espacialmente para restaurar a função de barreira do epitélio danificado. Na primeira fase, inflamações, neutrófilos e macrófagos migram para a ferida, mobilizando defesas locais e sistêmicas¹. Seguir e sobrepor a fase inflamatória é o estágio de proliferação. Os fibroblastos começam a proliferar rapidamente e migrar para o tecido de granulação. Os queratinócitos para longe da borda principal proliferam direcionalmente em direção à ferida à medida que queratinócitos diferenciados na borda principal migram para re-epitelializar a ferida². Finalmente, começa a fase de remodelação e maturação, durante a qual os fibroblastos no tecido de granulação começam a sintetizar e depositar colágeno. A remodelagem e organização da nova matriz pode durar até 1 ano após a lesão³. Devido à complexidade dos eventos sobrepostos envolvendo conversas cruzadas entre múltiplos tipos celulares, e apesar de anos de pesquisa, muitos dos mecanismos celulares e moleculares subjacentes à cicatrização das feridas permanecem mal compreendidos.

O modelo de camundongos é o modelo predominante de mamíferos para investigar mecanismos de cicatrização de feridas devido à sua facilidade de uso, custo relativamente baixo e manipulabilidade genética^1,4,5. Embora diferentes tipos de feridas tenham sido descritas no modelo murino, o mais comum é uma ferida excisional (seja um soco bilateral ou biópsia direta do soco), seguida pelos modelos de ferida incisional⁴. O modelo de ferida excisional tem uma vantagem distinta sobre o modelo incisional, pois inerentemente gera tecido de controle que não passou pelo processo de cicatrização. O tecido de biópsia de soco excisado como parte do protocolo cirúrgico pode ser processado da mesma forma que o tecido ferido e usado para estabelecer as condições homeostáticas para um critério desejado. O tecido de controle excisado também pode ser útil se avaliar os efeitos de um pré-tratamento da pele ou confirmar alteração genética bem sucedida no momento da lesão⁴.

Os parâmetros de cura podem ser avaliados por muitas técnicas diferentes, incluindo planimetria ou histologia. No entanto, a planimetria só pode avaliar características visíveis da ferida, e devido à presença de uma cicatriz, muitas vezes não se correlaciona com medidas de cura que são visualizadas pela histologia, tornando a histologia o “padrão-ouro” da análise⁴. Apesar da análise histológica ser o padrão-ouro, é mais frequentemente realizada em um subconjunto arbitrário da ferida^6,7. Por exemplo, cortar a ferida em “metade” antes de incorporar e seccionar a ferida é a prática comum para reduzir o tempo e os recursos gastos na seção de materiais e análise de dados. O método de análise morfométrica descrito neste protocolo foi desenvolvido para abranger todo o tecido da ferida, para refletir com precisão as características morfológicas da ferida, e para aumentar a probabilidade de detectar defeitos de cicatrização de feridas com um pequeno tamanho de efeito. Neste protocolo, detalhamos um método cirúrgico para a geração da ferida murina mais estudada, a ferida excisional de espessura total bilateral, bem como um método detalhado e rigoroso para análise histológica, como raramente é utilizado no campo.