Murine Excisional Wound Healing Model и гистологический морфометрический анализ ран

Заживление к cutaneous раны сложный биологический процесс с последовательно перекрывая участками. Она требует координации клеточных и молекулярных процессов, которые временно и пространственно регулируются для восстановления барьерной функции поврежденного эпителия. На первой фазе воспаление, нейтрофилов и макрофаги мигрируют в рану, мобилизуя местную и системную^{защиту 1.} После и перекрытия воспалительной фазы является стадия распространения. Фибробласты начинают быстро размножаться и мигрировать в гранулированную ткань. Кератиноциты от ведущего края направленно размножаются к ране, как дифференцированные кератиноциты в переднем крае мигрируют, чтобы повторно эпителиализировать^{рану 2}. Наконец, начинается фаза ремоделирования и созревания, во время которой фибробласты в гранулированной ткани начинают синтезировать и от депозитать коллаген. Реконструкция и организация новой матрицы может длиться до 1 года после травмы³. Из-за сложности перекрывающихся событий, связанных с перекрестным разговором между несколькими типами клеток, и, несмотря на годы исследований, многие клеточные и молекулярные механизмы, лежащие в основе заживления ран, остаются плохо понятыми.

Модель мыши является преобладающей моделью млекопитающих для исследования механизмов заживления ран из-за их простоты использования, относительно низкой стоимости и^{генетической манипулябельности 1,4,5.} Хотя различные типы ран были описаны в модели мурина, наиболее распространенным является excisional раны (либо двусторонний удар или прямой удар биопсии), а затем разрезные модели^{раны 4}. Эксцисионная модель раны имеет явное преимущество перед разрезной моделью, поскольку она по своей сути генерирует контрольную ткань, которая не прошла процесс заживления. Пунш биопсии ткани, которая вырезана в рамках хирургического протокола могут быть обработаны таким же образом, как раненые ткани и используется для создания гомеостатической условия для желаемого критерия. Акцизная контрольная ткань также может быть полезна при оценке последствий предлечения кожи или подтверждении успешного изменения гена во время травмы^4.

Параметры исцеления могут быть оценены по различным методикам, включая планиметрию или гистологию. Тем не менее, планиметрия может только оценить видимые характеристики раны, и из-за наличия парши, часто не коррелирует с измерениями исцеления, которые визуализированы гистологии, тем самым делая гистологию “золотым стандартом” анализа⁴. Несмотря на гистологический анализ, является золотым стандартом, чаще всего он выполняется на произвольном подмножестве^{раны 6,7.} Например, сокращение раны на “половину” до встраивания и секции раны в настоящее время является обычной практикой для сокращения времени и ресурсов, затраченных на секционные материалы и анализ данных. Метод морфометрического анализа, описанный в этом протоколе, был разработан, чтобы охватить всю раневую ткань, точно отражать морфологические характеристики раны, а также увеличить вероятность обнаружения дефектов заживления ран с небольшим размером эффекта. В этом протоколе мы подробно хирургического метода для генерации наиболее часто изученных мурин раны, двусторонней полной толщины эксцизной раны, а также подробный и строгий метод гистологического анализа такие редко используется в полевых условиях.