Yüksek Verimli Bir Elektrokemilüminesans 7-Plex Testi Aynı Anda Tip 1 Diyabet ve Çoklu Otoimmün Hastalıklar İçin Tarama

Tahlil sonuçlarının analizi Tablo 1, Tablo 2 ve Tablo 3’te gösterilmiştir. Okuma değerleri, aynı kuyu içindeki 10 noktadan gelen verilerden gelir. Her numune için indeks değerleri, tahlil protokolünde açıklandığı gibi karşılık gelen iç pozitif ve negatif kontrollere karşı hesaplanmıştır. Hatalı yineleme örnekleri Tablo 1’de gösterilmiştir ve Tablo 3’te son dizin hesaplama hatasına neden olmuştur. Yanlış pozitif veya yanlış negatif sonuçlardan kaçınmak için tüm ham sayım değerleri kontrol edilmelidir. 7-multipleks ECL testi, T1D’li 1026 yeni tanı konmuş hastadan alınan örneklerin büyük bir kohortu kullanılarak doğrulandı ve 1022 yaş ve cinsiyet uyumlu sağlıklı kontrol denekleri. 1026 T1D hastaları için 7-Plex ECL testinden elde edilen otoantikorların seviyeleri, Şekil 2’de gösterildiği gibi karşılık gelen tek ECL tahlillerimizin her birinden ve Şekil 3’te gösterildiği gibi karşılık gelen her bir standart RBA ve ELISA’dan alınan seviyelerle karşılaştırılmıştır. Tahlil özgüllükleri, tiroid otoantikorları (95. persentilin kullanıldığı yerlerde) dışındaki tüm otoantikor tahlilleri için 99. persentillerde, Tablo 4’te listelenen üç tahlil yönteminin (7-Plex ECL, tek ECL, RBA veya ELISA) 1022 sağlıklı kontrolünün aynısı olarak ayarlanmıştır. GADA, IA-2A, IAA, TPOA, ThGA, TGA ve IFN�A’nın tahliller arası özgeçmişleri sırasıyla %6.4, %4.5, %9.1, %4.9, %5.7, .3 ve %5.9’dur. 7 otoantikorun her biri için az sayıda uyumsuz örnek, her tahlil için kesiklerin sınır çizgisi etrafında bulundu (Şekil 2 ve Şekil 3). On bir kontrol örneğinde (11/1022, %1.1) sadece 7-Plex testinde çoklu otoantikor pozitif, karşılık gelen her bir testte negatif bulundu. Benzer şekilde, T1D hastalarının 9 örneğinde de görüldü (9/1026,% 0.9). Ek olarak, 7-Plex testinde hem de RBA’da görülen hasta kohortunda 10 yüksek pozitif TPOA ve bir ThGA kaçırıldı. Bu örnekler, daha fazla seyreltildiğinde 7-Plex testinde pozitif olarak dönüştürüldü. Genel olarak, tek ECL tahlilinde veya RBA’da pozitifliğin% 100’ü, Tablo 4’te gösterildiği gibi aynı tahlil özgüllüğü ile 7-Plex ECL testinde ele alınmıştır. Resim 1: Mutiplex ECL testinin çizimi.Serumdaki otoantikorlar Ru Sulfo-NHSged antijenini biyotinile antijene bağlayacaktır. Bu, bir antijen-antikor-antijen-bağlayıcı kompleksi oluşturmak için spesifik bir bağlayıcı ile birleştirilir. Kompleksler plakaya yakalanır ve her bir özel bağlayıcı aracılığıyla belirli noktalarına kadar tutulur. 7 farklı antijen proteini için özel olarak bağlanmış bağlayıcı sayıları gösterilmiştir. Antikor sinyallerinin tespiti, elektrokemilüminesanslı Ru Sulfo-NHS etiketli antijenler kullanılarak gerçekleştirilir. Şekil Gu, Y. ve ark.13’tendir. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 2: T1D’li 1026 yeni başlangıçlı hastada 7 otoantikor düzeyinin tek EKL testi ile 7-Plex EKL testi arasında karşılaştırılması.A, b, c, d, e, f ve g panelleri sırasıyla GADA, IA-2A, IAA, TGA, TPOA, ThGA ve IFNαA için otoantikor seviyelerinin karşılaştırmalarını gösterir. Noktalı çizgiler, her otoantikor testi için tahlil kesiklerini temsil eder. Kesikler, Tablo4’te gösterildiği gibi, her bir tahlil için 1022 yaş uyumlu sağlıklı kontrolün 99. yüzdelik dilimine (95. yüzdelik dilime ayarlanmış TPOA ve ThGA hariç), hem tek hem de multipleks ECL testleri için 1022 yaş eşleştirilmiş sağlıklı kontrollerden ayarlanmıştır. Kırmızı kapalı elmaslar, incelenen kohortun% <1'i olan 7-Plex ECL testinde 'yanlış' pozitifler olarak işaretlenmiştir ve hem tek ECL hem de RBA'da negatif olarak doğrulanmıştır. Kırmızı yakın kareler, 'prozon' fenomeninin neden olduğu 7-Plex ECL testinde, esas olarak incelenen kohortun% <1'inde TPOA testinde meydana gelen 'yanlış' negatifler olarak işaretlenmiştir. Bu yanlış pozitif ve yanlış negatif sonuçların her ikisi de tartışma bölümünde tartışılmaktadır. Şekil Gu, Y. ve ark.13’tendir. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. Şekil 3: T1D’li 1026 yeni başlangıçlı hastada RBA (IFNαA için ELISA) ve 7-Plex ECL testi arasında 7 otoantikor seviyesinin karşılaştırılması.Panel a, b, c, d, e, f ve g sırasıyla GADA, IA-2A, IAA, TGA, TPOA, ThGA ve IFNαA için otoantikor düzeylerinin karşılaştırmalarını sunar. Noktalı çizgiler, her otoantikor testi için tahlil kesiklerini, hem RBA hem de 7-Plex ECL testi için ayarlanan aynı özgüllüğü, Tablo 4’te gösterildiği gibi, 1022 yaş uyumlu sağlıklı kontrollerden temsil eder. Kırmızı kapalı elmaslar ve kareler, 7-Plex ECL testinde görünen ‘yanlış’ pozitifleri ve ‘yanlış’ negatifleri temsil eder, aynısı Şekil 2’de gösterilmiştir. Şekil Gu, Y. ve ark.13’tendir. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın. 1 2 3 4 5 6 A 5580 5674 105 117 125 139 bağlayıcı-1 100 108 102 102 3956 3745 bağlayıcı-2 115 124 107 116 113 124 bağlayıcı-3 67 64 68 61 65 69 bağlayıcı-4 89 87 98 92 90 80 bağlayıcı-5 87 71 89 87 61 72 bağlayıcı-6 94 82 79 85 2154 2280 bağlayıcı-7 75 66 1628 1594 81 83 bağlayıcı-8 98 103 71 84 69 85 bağlayıcı-9 102 118 93 98 113 99 bağlayıcı-10 B 324 337 147 148 5426 5366 bağlayıcı-1 101 102 93 88 86 74 bağlayıcı-2 111 119 119 123 66 72 bağlayıcı-3 72 65 59 68 74 67 bağlayıcı-4 81 98 83 92 79 72 bağlayıcı-5 90 84 93 86 70 76 bağlayıcı-6 101 105 101 97 956 944 bağlayıcı-7 82 83 189 204 97 90 bağlayıcı-8 92 83 78 64 82 78 bağlayıcı-9 83 79 88 93 4722 4965 bağlayıcı-10 C 110 110 87 81 2114 2365 bağlayıcı-1 5526 5680 88 70 86 93 bağlayıcı-2 114 132 67 71 3326 3284 bağlayıcı-3 64 62 88 74 64 80 bağlayıcı-4 94 82 86 75 89 76 bağlayıcı-5 77 87 75 63 70 86 bağlayıcı-6 77 86 71 84 138 121 bağlayıcı-7 73 86 80 79 59 73 bağlayıcı-8 86 74 5064 4923 88 86 bağlayıcı-9 105 113 85 80 124 114 bağlayıcı-10 D 98 88 92 84 136 127 bağlayıcı-1 288 291 86 86 558 564 bağlayıcı-2 109 101 74 73 141 127 bağlayıcı-3 78 66 66 55 74 66 bağlayıcı-4 79 83 79 86 96 91 bağlayıcı-5 83 86 96 89 86 73 bağlayıcı-6 87 89 77 87 841 855 bağlayıcı-7 74 72 60 72 90 95 bağlayıcı-8 68 75 331 328 2460 2580 bağlayıcı-9 86 98 80 75 123 133 bağlayıcı-10 E 101 114 101 106 532 548 bağlayıcı-1 101 96 110 104 682 675 bağlayıcı-2 6015 5988 124 126 101 98 bağlayıcı-3 66 71 82 71 80 62 bağlayıcı-4 102 97 99 80 83 110 bağlayıcı-5 82 67 81 80 60 85 bağlayıcı-6 85 95 52 84 245 221 bağlayıcı-7 72 78 82 74 486 503 bağlayıcı-8 77 97 97 77 56 66 bağlayıcı-9 114 104 5726 5814 259 253 bağlayıcı-10 F 119 120 133 118 112 96 bağlayıcı-1 101 91 100 95 96 82 bağlayıcı-2 406 395 111 123 2127 101 bağlayıcı-3 72 60 86 72 79 83 bağlayıcı-4 76 85 96 99 89 103 bağlayıcı-5 88 78 91 83 89 95 bağlayıcı-6 104 97 87 102 56 66 bağlayıcı-7 76 77 79 93 69 75 bağlayıcı-8 85 71 95 100 83 71 bağlayıcı-9 131 131 358 364 92 86 bağlayıcı-10 G 90 95 85 82 105 107 bağlayıcı-1 99 86 77 76 1250 1174 bağlayıcı-2 119 123 120 118 112 108 bağlayıcı-3 76 83 77 80 86 76 bağlayıcı-4 88 86 86 93 107 92 bağlayıcı-5 73 73 71 82 84 75 bağlayıcı-6 5210 5173 72 69 76 85 bağlayıcı-7 80 81 79 82 100 101 bağlayıcı-8 96 97 89 83 65 83 bağlayıcı-9 98 103 86 88 1933 1979 bağlayıcı-10 H 114 124 81 86 299 295 bağlayıcı-1 107 92 69 72 4256 4388 bağlayıcı-2 114 123 125 129 501 536 bağlayıcı-3 77 70 67 64 74 62 bağlayıcı-4 92 110 81 84 77 71 bağlayıcı-5 87 79 72 76 83 81 bağlayıcı-6 328 341 84 80 88 97 bağlayıcı-7 75 84 75 90 74 83 bağlayıcı-8 73 79 78 76 84 70 bağlayıcı-9 113 120 81 76 2372 2350 bağlayıcı-10 Tablo 1: 7-plex ECL testinin analizi: ham CPS sayıları (plakanın sol yarısı). Ham CPS sayımları bir tahlil plakasından (plakanın sol yarısı) elde edilir ve her numune çift olarak gerçekleştirilir. Plakanın her satırının (A-H) altında, aynı kuyucuk içindeki 10 noktadan gelen verileri temsil eden ve işaretlenmiş her bağlayıcı numarasına karşılık gelen 10 satır okuma değeri vardır. Hatalı yineleme örnekleri, satır F-bağlayıcı 3-sütun 5 ve 6’da görüldüğü gibi gri renkle vurgulanır. Tablo 1A Satırı Tablo 1A Sütunu bağlayıcı 1 bağlayıcı 2 bağlayıcı 3 bağlayıcı 7 bağlayıcı 8 bağlayıcı 9 bağlayıcı 10 A 1-2 GADA PC 5627 104 120 88 71 101 110 B 1-2 GADA Düşük PC 331 102 115 103 83 88 81 C 1-2 TPOA Bilgisayar 110 5603 123 82 80 80 109 D 1-2 TPOA Düşük PC 93 290 105 88 73 72 92 E 1-2 TGA Bilgisayar 108 99 6002 90 75 87 109 F 1-2 TG Düşük PC 120 96 401 101 77 78 131 G 1-2 ThGA Bilgisayar 93 93 121 5192 81 97 101 H 1-2 ThGA Düşük PC 119 100 119 335 80 76 117 A 3-4 IAA Bilgisayar 111 102 112 82 1611 78 96 B 3-4 IAA Düşük PC 148 91 121 99 197 71 91 C 3-4 IFNaA Bilgisayar 84 79 69 78 80 4994 83 D 3-4 IFNaA Düşük PC 88 86 74 82 66 330 78 E 3-4 IA-2A Bilgisayar 104 107 125 68 78 87 5770 F 3-4 IA-2A Düşük PC 126 98 117 95 86 98 361 G 3-4 NC 84 77 119 71 81 86 87 H 3-4 NC 84 71 127 82 78 77 79 A 5-6 örnek1 132 3851 119 2217 82 77 106 B 5-6 örnek2 5396 80 69 950 94 80 4844 C 5-6 örnek3 2240 90 3305 130 66 87 119 D 5-6 örnek4 132 561 134 848 93 2520 128 E 5-6 örnek5 540 679 100 233 495 61 256 F 5-6 örnek6 104 89 1114 61 72 77 89 G 5-6 örnek7 106 1212 110 81 101 74 1957 H 5-6 örnek8 297 4322 519 93 79 77 2361 Tablo 2: 7-plex ECL testinin analizi: 7 bağlayıcı olarak işaretlenmiş Tablo 1 verilerinin düzenlenmesi. Tablo 1’deki veriler yeniden düzenlendi, 4 ile 6 arasındaki bağlayıcılar (kullanılmadı) silindi ve Tablo 1’deki her yinelenen okumadan ortalama değerler hesaplandı. Belirli bir bağlayıcı tarafından kısıtlanan her otoantikor testine karşılık gelen dahili standart yüksek ve düşük pozitif kontrollerin değerleri koyu renklidir. PC, pozitif kontrol. NC, normal kontrol. GAD-İndeks TPOA-İndeks TGA-İndeks ThGA-İndeksi IAA-Endeksi IFNaA-Endeksi IA-2A-İndeksi GADA PC 1.000 0.005 0.000 0.003 -0.006 0.003 0.004 GADA Düşük PC 0.045 0.005 -0.001 0.006 0.002 0.000 -0.001 IAA Bilgisayar 0.005 1.000 0.001 0.002 -0.001 -0.001 0.004 IAA Düşük PC 0.002 0.039 -0.002 0.003 -0.005 -0.003 0.001 IA-2A Bilgisayar 0.004 0.004 1.000 0.004 -0.004 0.000 0.004 IA-2A Düşük PC 0.007 0.004 0.048 0.006 -0.002 -0.002 0.008 TGA Bilgisayar 0.002 0.003 0.000 1.000 0.000 0.002 0.002 TG Düşük PC 0.006 0.004 0.000 0.052 -0.001 -0.002 0.005 TPOA Bilgisayar 0.005 0.005 -0.001 0.002 1.000 -0.002 0.001 TPOA Düşük PC 0.012 0.003 0.000 0.006 0.076 -0.003 0.001 ThGA Bilgisayar 0.000 0.000 -0.008 0.001 0.000 1.000 -0.001 ThGA Düşük PC 0.001 0.002 -0.008 0.002 -0.009 0.050 -0.002 IFNaA Bilgisayar 0.004 0.006 0.001 0.000 -0.002 0.000 1.000 IFNaA Düşük PC 0.008 0.004 0.000 0.005 0.004 0.002 0.048 NC 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 NC 0.000 -0.001 0.001 0.002 -0.002 -0.002 -0.001 örnek1 0.009 0.683 0.000 0.419 0.001 -0.002 0.003 örnek2 0.958 0.001 -0.008 0.172 0.009 -0.001 0.837 örnek3 0.389 0.002 0.542 0.012 -0.009 0.000 0.006 örnek4 0.009 0.088 0.003 0.152 0.008 0.496 0.007 örnek5 0.082 0.109 -0.003 0.032 0.271 -0.005 0.030 örnek6 0.004 0.002 0.169 -0.002 -0.006 -0.002 0.000 örnek7 0.004 0.205 -0.002 0.002 0.013 -0.002 0.329 örnek8 0.039 0.768 0.068 0.004 -0.001 -0.002 0.400 Tablo 3: 7-plex ECL testinin analizi: indeks değerlerinin sonuçları. 7 otoantikor testinin tümü için her numunenin indeks değerleri, tahlil protokolünde açıklandığı gibi karşılık gelen iç pozitif ve negatif kontrollere karşı hesaplanmıştır. Kesme değerinden daha büyük olan herhangi bir endeks değeri, koyu kalın olarak gösterilen pozitif bir sonuç olarak tanımlanmıştır. Örnek6’nın TGA dizini değeri, Tablo 1’deki satır F-bağlayıcı 3-sütun 5 ve 6’da gösterilen hatalı yinelemelerin neden olduğu bir hata olduğu için gri renkle vurgulanmıştır. cesaret IA-2A IAA .TGA TPOA ThGA IFNαA* Şili Spec Şili Spec Şili Spec Şili Spec Şili Spec Şili Spec Şili Spec RBA (Mali İşler T 73.4% 98.5% 75.2% 99.0% 47.7% 99.1% 12.9% 99.0% 23.9% 95.2% 19.3% 94.7% 1.0% 99.6% Tek ECL 71.6% 99.1% 73.6% 99.3% 48.3% 99.7% 16.0% 98.9% 26.3% 94.9% 20.6% 95.1% 0.8% 99.2% 7-Plex ECL 71.2% 98.9% 77.3% 98.9% 49.5% 98.9% 16.5% 98.7% 26.1% 94.7% 21.1% 94.7% 1.7% 99.1% Tablo 4: 1026 T1D hastası ve 1022 kontrol arasında, 7 pleks ECL testinde, karşılık gelen tek EKL testi ve RBA veya ELISA* ile karşılaştırıldığında, hem yaş hem de cinsiyet için eşleştirilen tahlil duyarlılığı ve özgüllüğü. Her otoantikoriçin farklı tahliller (RBA, tek ECL ve 7-Plex ECL), 1022 yaş ve cinsiyet uyumlu sağlıklı kontroller kullanılarak benzer özgüllüklere ayarlandı. İncelenen kontrol kohortunun özgüllük sonucu, TPOA ve ThGA için% 95 civarında ve diğer 5 tahlil için% 99 olarak belirlenmiştir. *Yıldız işareti, ELISA için IFNαA testini işaretlerken, diğerleri RBA’dır.