فحص التلألؤ الكهروكيميائي عالي الإنتاجية 7-Plex في وقت واحد لمرض السكري من النوع 1 وأمراض المناعة الذاتية المتعددة

ويبين تحليل نتائج الفحص في الجدول 1 والجدول 2 والجدول 3. تأتي قيم القراءة من البيانات من 10 نقاط داخل نفس البئر. تم حساب قيم الفهرس لكل عينة مقابل الضوابط الداخلية الإيجابية والسلبية المقابلة لها كما هو موضح في بروتوكول المقايسة. وترد أمثلة على التكرارات السيئة في الجدول 1 والتي تسببت في حدوث خطأ في حساب الفهرس النهائي في الجدول 3. يجب التحقق من جميع قيم العد الخام لتجنب أي نتائج إيجابية خاطئة أو سلبية خاطئة. تم التحقق من صحة فحص ECL متعدد الإرسال 7 باستخدام مجموعة كبيرة من العينات من 1026 مريضا تم تشخيصهم حديثا ب T1D و 1022 من العمر والجنس المتطابقين مع مواضيع التحكم الصحية. تمت مقارنة مستويات الأجسام المضادة الذاتية من فحص 7-Plex ECL ل 1026 مريضا T1D مع المستويات من كل من اختبارات ECL الفردية المقابلة لدينا كما هو موضح في الشكل 2 ومن كل RBA قياسي واحد مقابل و ELISA كما هو موضح في الشكل 3. تم إعداد خصائص الفحص متطابقة عند 99في المائة لجميع اختبارات الأجسام المضادة الذاتية باستثناء الأجسام المضادة الذاتية للغدة الدرقية (حيث تم استخدام النسبة المئوية 95) ، من 1022 عنصر تحكم صحي لجميع طرق الفحص الثلاثة (7-Plex ECL أو ECL مفرد أو RBA أو ELISA) كما هو مدرج في الجدول 4. السير الذاتية بين الفحص من GADA و IA-2A و IAA و TPOA و THGA و TGA و IFNαA هي 6.4٪ و 4.5٪ و 9.1٪ و 4.9٪ و 5.7٪ و 11.3٪ و 5.9٪ على التوالي. تم العثور على عدد صغير من العينات المتضاربة لكل من الأجسام المضادة الذاتية ال 7 حول خط الحدود من القطع لكل مقايسة (الشكل 2 والشكل 3). تم العثور على إحدى عشرة عينة تحكم (11/1022 ، 1.1٪) إيجابية متعددة للأجسام المضادة الذاتية فقط في فحص 7-Plex وسالبة في كل فحص واحد مقابل. وبالمثل ، حدث ذلك في 9 عينات من مرضى T1D (9/1026 ، 0.9٪). بالإضافة إلى ذلك ، تم تفويت 10 TPOA إيجابية عالية و ThGA واحد في مجموعة المرضى التي شوهدت في كل من فحص ECL الفردي و RBA في فحص 7-Plex. تم تحويل هذه العينات إيجابية في فحص 7-Plex عندما تم تخفيفها أكثر. بشكل عام ، تمت تغطية 100٪ من الإيجابية في فحص ECL الفردي أو RBA في اختبار ECL 7-Plex ، بنفس خصوصية المقايسة كما هو موضح في الجدول 4. الشكل 1: رسم توضيحي لفحص Mutiplex ECL.الأجسام المضادة الذاتية في المصل سوف تربط مستضد Ru Sulfo-NHSged بمستضد البيوتينيلات. ويقترن ذلك برابط محدد لتشكيل مجمع من رابط المستضد والأجسام المضادة والمستضدات. يتم التقاط المجمعات على اللوحة ويتم تقييدها إلى مواقعها المحددة من خلال كل رابط محدد. يتم توضيح أرقام الروابط المقترنة على وجه التحديد ، ل 7 بروتينات مستضدية مختلفة. يتم الكشف عن إشارات الأجسام المضادة باستخدام مستضدات Ru Sulfo-NHS المسماة بالمستضدات مع التلألؤ الكهروكيميائي. الرقم مأخوذ من Gu, Y. et al.13. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. الشكل 2: مقارنة 7 مستويات من الأجسام المضادة الذاتية في 1026 مريضا جديدا يعانون من T1D بين فحص ECL الفردي وفحص ECL 7-Plex.تعرض اللوحات A و B و C و D و E و F و G مقارنات لمستويات الأجسام المضادة الذاتية ل GADA و IA-2A و IAA و TKA و TPOA و THGA و IFNαA ، على التوالي. تمثل الخطوط المنقطة قطع الفحص لكل فحص للأجسام المضادة الذاتية. تم تعيين القطع إلى النسبة المئوية 99 من 1022 ضوابط صحية مطابقة للعمر لكل فحص (باستثناء TPOA و ThGA اللذين تم تعيينهماعلى النسبة المئوية 95) ، كما هو موضح في الجدول 4 ، من سن 1022 مطابقة الضوابط الصحية لكل من فحوصات ECL الفردية والمتعددة الإرسال. يتم وضع علامة على الماس الأحمر المغلق على أنه إيجابيات “كاذبة” في فحص 7-Plex ECL ، <1٪ من المجموعة التي تمت دراستها ، وتم التحقق من صحتها على أنها سلبية في كل من ECL الفردي و RBA. يتم وضع علامة على المربعات الحمراء القريبة على أنها سلبيات "كاذبة" في فحص ECL 7-Plex الناجم عن ظاهرة "prozone" ، والتي تحدث بشكل رئيسي في فحص TPOA في <1٪ من المجموعة التي تمت دراستها. تتم مناقشة كل من هذه النتائج الإيجابية الكاذبة والسلبية الكاذبة في قسم المناقشة. الرقم مأخوذ من Gu, Y. et al.13. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. الشكل 3: مقارنة 7 مستويات من الأجسام المضادة الذاتية في 1026 مريضا جديدا يعانون من T1D بين RBA (ELISA for IFNαA) وفحص 7-Plex ECL.تقدم اللوحات A و B و C و D و E و F و G مقارنات لمستويات الأجسام المضادة الذاتية ل GADA و IA-2A و IAA و TKA و TPOA و THGA و IFNαA ، على التوالي. تمثل الخطوط المنقطة قطع الفحص لكل فحص للأجسام المضادة الذاتية ، وهي نفس الخصوصية المحددة لكل من RBA و 7-Plex ECL ، كما هو موضح في الجدول 4 ، من سن 1022 مطابقة الضوابط الصحية. يمثل الماس والمربعات الحمراء المغلقة إيجابيات “كاذبة” وسلبيات “كاذبة” تظهر في فحص 7-Plex ECL ، ويظهر الشيء نفسه في الشكل 2. الرقم مأخوذ من Gu, Y. et al.13. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. 1 2 3 4 5 6 A 5580 5674 105 117 125 139 لينكر-1 100 108 102 102 3956 3745 لينكر-2 115 124 107 116 113 124 لينكر-3 67 64 68 61 65 69 لينكر-4 89 87 98 92 90 80 لينكر-5 87 71 89 87 61 72 لينكر-6 94 82 79 85 2154 2280 لينكر-7 75 66 1628 1594 81 83 لينكر-8 98 103 71 84 69 85 لينكر-9 102 118 93 98 113 99 لينكر-10 B 324 337 147 148 5426 5366 لينكر-1 101 102 93 88 86 74 لينكر-2 111 119 119 123 66 72 لينكر-3 72 65 59 68 74 67 لينكر-4 81 98 83 92 79 72 لينكر-5 90 84 93 86 70 76 لينكر-6 101 105 101 97 956 944 لينكر-7 82 83 189 204 97 90 لينكر-8 92 83 78 64 82 78 لينكر-9 83 79 88 93 4722 4965 لينكر-10 C 110 110 87 81 2114 2365 لينكر-1 5526 5680 88 70 86 93 لينكر-2 114 132 67 71 3326 3284 لينكر-3 64 62 88 74 64 80 لينكر-4 94 82 86 75 89 76 لينكر-5 77 87 75 63 70 86 لينكر-6 77 86 71 84 138 121 لينكر-7 73 86 80 79 59 73 لينكر-8 86 74 5064 4923 88 86 لينكر-9 105 113 85 80 124 114 لينكر-10 D 98 88 92 84 136 127 لينكر-1 288 291 86 86 558 564 لينكر-2 109 101 74 73 141 127 لينكر-3 78 66 66 55 74 66 لينكر-4 79 83 79 86 96 91 لينكر-5 83 86 96 89 86 73 لينكر-6 87 89 77 87 841 855 لينكر-7 74 72 60 72 90 95 لينكر-8 68 75 331 328 2460 2580 لينكر-9 86 98 80 75 123 133 لينكر-10 E 101 114 101 106 532 548 لينكر-1 101 96 110 104 682 675 لينكر-2 6015 5988 124 126 101 98 لينكر-3 66 71 82 71 80 62 لينكر-4 102 97 99 80 83 110 لينكر-5 82 67 81 80 60 85 لينكر-6 85 95 52 84 245 221 لينكر-7 72 78 82 74 486 503 لينكر-8 77 97 97 77 56 66 لينكر-9 114 104 5726 5814 259 253 لينكر-10 F 119 120 133 118 112 96 لينكر-1 101 91 100 95 96 82 لينكر-2 406 395 111 123 2127 101 لينكر-3 72 60 86 72 79 83 لينكر-4 76 85 96 99 89 103 لينكر-5 88 78 91 83 89 95 لينكر-6 104 97 87 102 56 66 لينكر-7 76 77 79 93 69 75 لينكر-8 85 71 95 100 83 71 لينكر-9 131 131 358 364 92 86 لينكر-10 G 90 95 85 82 105 107 لينكر-1 99 86 77 76 1250 1174 لينكر-2 119 123 120 118 112 108 لينكر-3 76 83 77 80 86 76 لينكر-4 88 86 86 93 107 92 لينكر-5 73 73 71 82 84 75 لينكر-6 5210 5173 72 69 76 85 لينكر-7 80 81 79 82 100 101 لينكر-8 96 97 89 83 65 83 لينكر-9 98 103 86 88 1933 1979 لينكر-10 H 114 124 81 86 299 295 لينكر-1 107 92 69 72 4256 4388 لينكر-2 114 123 125 129 501 536 لينكر-3 77 70 67 64 74 62 لينكر-4 92 110 81 84 77 71 لينكر-5 87 79 72 76 83 81 لينكر-6 328 341 84 80 88 97 لينكر-7 75 84 75 90 74 83 لينكر-8 73 79 78 76 84 70 لينكر-9 113 120 81 76 2372 2350 لينكر-10 الجدول 1: تحليل فحص ECL 7-plex: عدد CPS الخام (النصف الأيسر من اللوحة). يتم الحصول على أعداد CPS الخام من لوحة فحص (النصف الأيسر من اللوحة) ويتم تنفيذ كل عينة في نسختين. تحت كل صف من صفوف اللوحة (A-H) ، هناك 10 أسطر من قيم القراءة تمثل البيانات من 10 نقاط داخل نفس البئر ، تتوافق مع كل رقم رابط كما هو محدد. يتم تمييز أمثلة التكرارات السيئة باللون الرمادي ، كما هو موضح في الصف F-linker 3-columns 5 و 6. صف الجدول 1 ألف عمود الجدول 1 ألف لينكر 1 لينكر 2 لينكر 3 لينكر 7 لينكر 8 لينكر 9 لينكر 10 A 1-2 GADA PC 5627 104 120 88 71 101 110 B 1-2 GADA منخفض الكمبيوتر 331 102 115 103 83 88 81 C 1-2 TPOA PC 110 5603 123 82 80 80 109 D 1-2 TPOA كمبيوتر منخفض 93 290 105 88 73 72 92 E 1-2 TGA PC 108 99 6002 90 75 87 109 F 1-2 TG كمبيوتر منخفض 120 96 401 101 77 78 131 G 1-2 ThGA PC 93 93 121 5192 81 97 101 H 1-2 ThGA منخفض الكمبيوتر 119 100 119 335 80 76 117 A 3-4 IAA PC 111 102 112 82 1611 78 96 B 3-4 IAA كمبيوتر منخفض 148 91 121 99 197 71 91 C 3-4 IFNaA PC 84 79 69 78 80 4994 83 D 3-4 IFNaA كمبيوتر منخفض 88 86 74 82 66 330 78 E 3-4 IA-2A PC 104 107 125 68 78 87 5770 F 3-4 IA-2A كمبيوتر منخفض 126 98 117 95 86 98 361 G 3-4 نورث كارولاينا 84 77 119 71 81 86 87 H 3-4 نورث كارولاينا 84 71 127 82 78 77 79 A 5-6 عينة1 132 3851 119 2217 82 77 106 B 5-6 عينة2 5396 80 69 950 94 80 4844 C 5-6 عينة3 2240 90 3305 130 66 87 119 D 5-6 عينة4 132 561 134 848 93 2520 128 E 5-6 عينة5 540 679 100 233 495 61 256 F 5-6 عينة6 104 89 1114 61 72 77 89 G 5-6 عينة7 106 1212 110 81 101 74 1957 H 5-6 عينة8 297 4322 519 93 79 77 2361 الجدول 2: تحليل فحص ECL 7-plex: ترتيب بيانات الجدول 1 ، مع وضع علامة على أنها 7 روابط. وأعيد ترتيب البيانات المستمدة من الجدول 1، مع حذف الروابط من 4 إلى 6 (غير المستخدمة)، وحسبت القيم المتوسطة من كل قراءة مكررة من الجدول 1. قيم الضوابط الإيجابية القياسية الداخلية العالية والمنخفضة ، المقابلة لكل فحص للأجسام المضادة الذاتية ، المقيدة بواسطة رابط معين ، هي بخط غامق مظلم. الكمبيوتر الشخصي ، والسيطرة الإيجابية. NC ، السيطرة العادية. مؤشر GAD مؤشر TPOA مؤشر TGA مؤشر ThGA IAA-Index IFNaA-index IA-2A-مؤشر GADA PC 1.000 0.005 0.000 0.003 -0.006 0.003 0.004 GADA منخفض الكمبيوتر 0.045 0.005 -0.001 0.006 0.002 0.000 -0.001 IAA PC 0.005 1.000 0.001 0.002 -0.001 -0.001 0.004 IAA كمبيوتر منخفض 0.002 0.039 -0.002 0.003 -0.005 -0.003 0.001 IA-2A PC 0.004 0.004 1.000 0.004 -0.004 0.000 0.004 IA-2A كمبيوتر منخفض 0.007 0.004 0.048 0.006 -0.002 -0.002 0.008 TGA PC 0.002 0.003 0.000 1.000 0.000 0.002 0.002 TG كمبيوتر منخفض 0.006 0.004 0.000 0.052 -0.001 -0.002 0.005 TPOA PC 0.005 0.005 -0.001 0.002 1.000 -0.002 0.001 TPOA كمبيوتر منخفض 0.012 0.003 0.000 0.006 0.076 -0.003 0.001 ThGA PC 0.000 0.000 -0.008 0.001 0.000 1.000 -0.001 ThGA منخفض الكمبيوتر 0.001 0.002 -0.008 0.002 -0.009 0.050 -0.002 IFNaA PC 0.004 0.006 0.001 0.000 -0.002 0.000 1.000 IFNaA كمبيوتر منخفض 0.008 0.004 0.000 0.005 0.004 0.002 0.048 نورث كارولاينا 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 نورث كارولاينا 0.000 -0.001 0.001 0.002 -0.002 -0.002 -0.001 عينة1 0.009 0.683 0.000 0.419 0.001 -0.002 0.003 عينة2 0.958 0.001 -0.008 0.172 0.009 -0.001 0.837 عينة3 0.389 0.002 0.542 0.012 -0.009 0.000 0.006 عينة4 0.009 0.088 0.003 0.152 0.008 0.496 0.007 عينة5 0.082 0.109 -0.003 0.032 0.271 -0.005 0.030 عينة6 0.004 0.002 0.169 -0.002 -0.006 -0.002 0.000 عينة7 0.004 0.205 -0.002 0.002 0.013 -0.002 0.329 عينة8 0.039 0.768 0.068 0.004 -0.001 -0.002 0.400 الجدول 3: تحليل فحص ECL 7-plex: نتائج قيم المؤشر. تم حساب قيم المؤشر لكل عينة لجميع اختبارات الأجسام المضادة الذاتية ال 7 مقابل الضوابط الإيجابية والسلبية الداخلية المقابلة لها كما هو موضح في بروتوكول المقايسة. تم تعريف أي قيمة مؤشر أكبر من القيمة المقطوعة على أنها نتيجة إيجابية ، موضحة بخط غامق داكن. تم تمييز قيمة مؤشر TGA للعينة6 باللون الرمادي لأنها خطأ ناتج عن تكرارات سيئة تظهر في الصف F-linker 3-columns 5 و 6 في الجدول 1. غادا IA-2A الاكاديميه .TGA تبوا ثغا IFNαA* سينس المواصفات سينس المواصفات سينس المواصفات سينس المواصفات سينس المواصفات سينس المواصفات سينس المواصفات بنك الاحتياطي الأسترالي 73.4% 98.5% 75.2% 99.0% 47.7% 99.1% 12.9% 99.0% 23.9% 95.2% 19.3% 94.7% 1.0% 99.6% ECL واحد 71.6% 99.1% 73.6% 99.3% 48.3% 99.7% 16.0% 98.9% 26.3% 94.9% 20.6% 95.1% 0.8% 99.2% 7-بلكس ECL 71.2% 98.9% 77.3% 98.9% 49.5% 98.9% 16.5% 98.7% 26.1% 94.7% 21.1% 94.7% 1.7% 99.1% الجدول 4: حساسية الفحص وخصوصيته بين 1026 مريضا من مرضى T1D و 1022 ضابطا ، متطابقة لكل من العمر والجنس ، في فحص ECL 7-plex ، مقارنة بفحص ECL الفردي المقابل و RBA أو ELISA *. تم تعيين فحوصات مختلفة ل T hree (RBA و ECL مفردة و 7-Plex ECL) لكل جسم مضاد ذاتي على خصائص مماثلة باستخدام الضوابط الصحية المتطابقة مع العمر والجنس 1022. تم تعيين نتيجة الخصوصية من مجموعة التحكم التي تمت دراستها حول 95٪ ل TPOA و ThGA و 99٪ ل 5 اختبارات أخرى. * علامة النجمة تشير إلى اختبار IFNαA ل ELISA ، في حين أن البعض الآخر هو RBA.