Summary

Livraison intra-artérielle de cellules souches neuronales au cerveau du rat et de la souris : application à l’ischémie cérébrale

Published: June 26, 2020
doi:

Summary

Une méthode pour fournir des cellules souches neurales, adaptable pour injecter des solutions ou des suspensions, par l’artère carotide commune (souris) ou l’artère carotide externe (rat) après un AVC ischémique est rapporté. Les cellules injectées sont réparties largement dans tout le parenchyme cérébral et peuvent être détectées jusqu’à 30 d après l’accouchement.

Abstract

La thérapie à base de cellules souches neuronales est un nouveau traitement novateur pour les accidents vasculaires cérébraux, les lésions cérébrales traumatiques et les troubles neurodégénératifs. Par rapport à la livraison intracrânienne, l’administration intra-artérielle des NSC est moins invasive et produit une distribution plus diffuse des NSC dans le parenchyme cérébral. En outre, la livraison intra-artérielle permet l’effet de première passe dans la circulation du cerveau, réduisant le potentiel de piégeage des cellules dans les organes périphériques, tels que le foie et la rate, une complication associée aux injections périphériques. Ici, nous détaillons la méthodologie, chez les souris et les rats, pour la livraison des NSC par l’artère carotide commune (souris) ou l’artère carotide externe (rat) à l’hémisphère ipsilateral après un accident vasculaire cérébral ischémique. À l’aide de NSC étiquetés GFP, nous illustrons la distribution généralisée réalisée dans tout l’hémisphère ipsilateral des rongeurs à 1 d, 1 semaine et 4 semaines après l’accouchement postischemique, avec une densité plus élevée dans ou près du site de blessures ischémiques. En plus de la survie à long terme, nous montrons des preuves de différenciation des cellules étiquetées GFP à 4 semaines. L’approche de livraison intra-artérielle décrite ici pour les NSC peut également être utilisée pour l’administration de composés thérapeutiques, et a donc une large applicabilité aux diverses lésions du SNC et les modèles de maladies chez plusieurs espèces.

Introduction

La thérapie à base de cellules souches (SC) offre un potentiel énorme en tant que traitement des maladies neurologiques, y compris les accidents vasculaires cérébraux, les traumatismes crâniens et la démence1,2,3,4,5,6. Cependant, une méthode efficace pour fournir des SC exogènes au cerveau malade reste problématique2,6,7,8,9,10,11,12,13. Les SC délivrés par voie d’accouchement périphérique, y compris l’injection intraveineuse (IV) ou intrapéritoneal (IP), sont soumis à un filtrage de première passe dans la microcirculation, en particulier dans le poumon, le foie, la rate et les muscles8,9,13,14, augmentant les chances d’accumulation de cellules dans les zones non ciblées. La méthode invasive d’injection intracérébrale entraîne des lésions localisées des tissus cérébraux et une distribution très restreinte des SC près du site d’injection2,6,8,14,15,16. Nous avons récemment établi une méthode d’injection intra-artérielle basée sur le cathéter pour fournir des SC neuronaux exogènes (NSC), qui est décrit ici appliqué dans un modèle de rongeur de course ischémique focale. Nous indussons transitoire (1 h) des dommages d’ischémie-reperfusion dans un hémisphère utilisant un filament enduit de caoutchouc de silicone pour occluser l’artère cérébrale moyenne gauche (MCA) dans la souris ou le rat17,18,19. Dans ce modèle, nous avons reproductiblement observé environ 75-85% dépression du flux sanguin cérébral (CBF) dans l’hémisphère ipsilateral avec Laser Doppler ou Laser speckle image image17,19, produisant des déficits neurologiques cohérents17,18,19.

Pour gagner du temps, la vidéo est réglée pour jouer à deux fois la vitesse normale et les procédures chirurgicales de routine telles que la préparation de la peau et la fermeture des plaies avec suture et l’utilisation et l’installation de la pompe à seringues motorisées ne sont pas présentés. La méthode de l’administration intra-artérielle des NSC est démontrée dans le contexte du modèle d’occlusion cérébrale moyenne (MCAO) de course expérimentale chez les rongeurs. Par conséquent, nous incluons la procédure transitoire d’AVC ischémique afin de démontrer plus tard comment la deuxième chirurgie, l’injection intra-artérielle, est exécutée utilisant le site chirurgical précédent sur le même animal. La faisabilité de l’administration intra-artérielle de la CSN dans les modèles d’AVC de rongeurs est démontrée par l’évaluation de la distribution et de la survie des NSC exogènes. L’efficacité de la thérapie de NSC pour atténuer la pathologie de cerveau et le dysfonctionnement neurologique sera rapportée séparément.

Protocol

Toutes les procédures sur les sujets animaux ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux (IACUC) de l’Université du Kentucky, et des précautions appropriées ont été prises pour minimiser le stress ou la douleur associés à la chirurgie. 1. Préparation de cathéters d’injection et de crochets chirurgicaux Construire le cathéter d’injection (figure 1). Recueillir les matériaux nécessaires, y …

Representative Results

Les NSC étiquetés GFP ont été facilement détectés dans le cerveau ischémique, principalement dans l’hémisphère ipsilateral, en particulier dans la pénombre et le long de la jante de blessure (Figure 6). L’examinateur a été aveugle pendant l’imagerie et l’analyse. Par exemple, à 1 d après l’injection, des NSC ont été détectés dans l’hippocampe de souris. Un sous-ensemble de NSCs a montré la co-expression du marqueur de neurone immatur…

Discussion

La thérapie de cellules souches pour les maladies neurologiques est encore à un stade exploratoire précoce. Un problème majeur est qu’il n’existe pas de méthode établie pour une livraison suffisante de SC ou de NSC dans le cerveau.

Bien que des CSC/NSC exogènes puissent être détectés dans le cerveau après l’injection intraveineuse (IV), intrapéritoneal (IP) ou intraparenchymal/intracérébrale, chaque approche d’accouchement présente des inconvénients. On estime que la po…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Cette recherche a été soutenue par ce qui suit : Prix AHA 14SDG20480186 pour LC, équipe d’innovation sujet de l’Université Shanxi de médecine chinoise 2019-QN07 pour BZ, et Kentucky Spinal Cord and Head Injury Research Trust subvention 14-12A pour KES et LC.

Materials

20 G needle Becton & Dickinson BD PrecisionGlide 305175 preparation of injection catheter
26 G needle Becton & Dickinson BD PrecisionGlide 305111 preparation of injection catheter
27 G needle Becton & Dickinson BD PrecisionGlide 305136 preparation of injection catheter
4-0 NFS-2 suture with needle Henry Schein Animal Health 56905 surgery
6-0 nylon suture Teleflex/Braintree Scientific 104-s surgery
Accutase STEMCELL Technologies 7922 cell detachment solution
blade Bard-Parker 10 surgery
Buprenorphine-SR Lab ZooPharm Buprenorphine-SR Lab® analgesia (0.6-1 mg/kg over 3 d)
Calcium/magnisum free PBS VWR 02-0119-0500 NSC dissociation
DCX antibody Millipore AB2253 immunostaining
GFAP antibody Invitrogen 180063 immunostaining
Isoflurane Henry Schein Animal Health 50562-1 surgery
MCAO filament for mouse Doccol 702223PK5Re surgery
MCAO filament for rat Doccol 503334PK5Re surgery
MRE010 catheter Braintree Scientific MRE010 preparation of injection catheter
MRE025 catheter Braintree Scientific MRE025 preparation of injection catheter
MRE050 catheter Braintree Scientific MRE050 preparation of injection catheter
Nu-Tears Ointment NuLife Pharmaceuticals Nu-Tears Ointment eye care during surgery
S&T Forceps – SuperGrip Tips JF-5TC Angled Fine Science Tools 00649-11 surgery
S&T Forceps – SuperGrip Tips JF-5TC Straight Fine Science Tools 00632-11 surgery
Superglue Pacer Technology 15187 preparation of injection catheter
syringe pump Kent Scientific GenieTouch surgery
Tuj1 antibody Millipore MAb1637 immunostaining
two-component 5 minute epoxy Devcon 20445 preparation of injection catheter
Vannas spring scissors Fine Science Tools 15000-08 surgery
vascular clamps Fine Science Tools 00400-03 surgery
Zeiss microscope Zeiss Axio Imager 2 microscopy

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Zhang, B., Joseph, B., Saatman, K. E., Chen, L. Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia. J. Vis. Exp. (160), e61119, doi:10.3791/61119 (2020).

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