Очистка фибробластов и клеток Шванн от сенсорных и моторных нервов в vitro

В периферической нервной системе нервные волокна в основном состоят из аксонов, клеток Шванн (СК) и фибробластов, а также содержит небольшое количество макрофагов, микрососудистых эндотелиальных клеток и иммунных клеток^1. SCs обернуть аксоны в соотношении 1:1 и заключены с помощью слоя соединительной ткани, называемого эндонеуриум. Аксоны затем в комплекте вместе, чтобы сформировать группы, называемые fascicles, и каждая фасцикля завернутый в слой соединительной ткани, известный как промежности. Наконец, все нервное волокно завернуто в слой соединительной ткани, который называется эпинеури. В эндонеуриум, вся популяция клеток состоит из 48% ОК, и значительная часть оставшихся клеток включает фибробласты². Кроме того, фибробласты являются важными компонентами всех нервных отсеков, включая эпинеуриум, промежную и эндонеуриум^3. Многие исследования показали, что ХК и фибробласты играют решающую роль в процессе регенерации после травмы периферического нерва^4,,5,,6. После трансекции периферического нерва, проницаемые фибробласты регулируют сортировку клеток через эпирин-B/EphB2 сигнальный путь между ОК и фибробластами, дальнейшее руководство аксональным отрастанием через раны^5. Периферические нервные фибробласты выделяют белок тенасцин-С и усиливают миграцию ХК во время регенерации нервов через сигнальный путь⁷1-интегрин. Тем не менее, ТС и фибробласты, используемые в вышеуказанных исследованиях, были получены из седалищного нерва, который включает в себя как сенсорные, так и моторные нервы.

В периферической нервной системе сенсорные нервы (афферентные нервы) проводят сенсорную сигнализацию от рецепторов к центральной нервной системе (ЦНС), в то время как моторные нервы (эфферентные нервы) проводят сигналы от ЦНС к мышцам. Предыдущие исследования показали, что РК выражают различные моторные и сенсорные фенотипы и выделяют нейротрофические факторы для поддержки периферической регенерации нервов^8,,9. Согласно недавнему исследованию, фибробласты также выражают различные двигательные и сенсорные фенотипы и влияют на миграцию SCs^10. Таким образом, изучение различий между моторными и сенсорными фибробластами нервов/ТС позволяет нам изучать сложные основные молекулярные механизмы периферической регенерации нервов.

В настоящее время существует множество способов очищения ОВ и фибробластов, включая применение антимитических агентов, антител-опосредованного цитолиза^11,,12,последовательного иммунопанирования¹³ и ламинина субстратом^14. Однако все вышеперечисленные методы удаляют фибробласты и сохраняют только НК. Высоко очищенные РК и фибробласты могут быть получены с помощью технологии сортировки цитометрии^{потока 15,}но это трудоемкая и дорогостоящая техника. Таким образом, в этом исследовании, простой дифференциальный пищеварения и дифференциального присоединения метод для очистки и изоляции сенсорных и моторных фибробластов нерва и РС был разработан для того, чтобы получить большое количество фибробластов и ОВ быстрее.