マウスにおける大腸誘導ピンチ生検の実施と、その後の組織変化の評価

消化管(GI)は、その多くの機能、宿主細胞型(例えば上皮、免疫、間質など)、および数兆個の微生物を与えられた複雑な器官系である。この複雑さに照らして、消化管の疾患は、多くの場合、これらの要因の相互作用を伴う。例えば、炎症性腸疾患(IBD)は、消化管における炎症および寛解のサイクルに関連しており、炎症性細胞の活性化、ジスビオシス、および上皮修復1、2、3、4、5、6、7を含^む。IBDおよびGI管の他の炎症性状態を研究するための適切なモデルシステムを有することは、疾患の病因を解明するために重要である。遺伝子組み換えマウスを含むIBDの病態を研究するためにいくつかのモデルが存在し、げっ歯類におけるデキストラン硫酸ナトリウム(DSS)などの化学物質の使用^8,9,10.これらのモデルの制限には、炎症の誘導を正確に制御できないことと、創傷治癒の評価における困難が含まれる。IBD病因の側面を模倣する別の方法は、治療法の開発に有用であることが証明できる。

マウスにおける大腸誘導ピンチ生検は、炎症反応の病因、創傷治癒、ならびに結腸における宿主と微生物の相互作用を研究するのに有用なモデルシステムを提供する。このアプローチは、2009年に実験的なツールとして初めて使用され、腸内の急性炎症反応および創傷治癒を研究するための有用性を実証^した。その後の研究では、腸内微生物叢と同様に異なるシグナル伝達経路の役割を評価するためにこの技術を利用し、大腸創傷治癒11、12、13、14、15、16、17、18。最近では、このモデルを用いて、大^腸損傷に対する急性応答におけるスフィンゴシン-1-リン酸シグナル伝達と細菌の重要性を調べた。有用であるが、マウスで大腸誘導ピンチ生検を行い、その後の組織の変化を評価することは技術的に困難であり得る。例えば、腸の穿穿は傷害の誘発時に起こり得、連続大腸内視鏡検査を通して創傷床の一貫した測定を保障することは困難であり得る。さらに、組織学的または免疫組織化学的分析のために創傷床を視覚化するために大腸組織を適切に配向させることは困難であり得る。これらの方法^18、20に関するいくつかの情報が存在するが^、これらの技術の正確なステップワイズの記述は、視覚補助は、このモデルの信頼性と広範な有用性を強化することを約束するであろう。ここでは、マウスで大腸誘導ピンチ生検を行い、時間の経過とともに創傷閉鎖を追跡し、創傷床の組織学的および分子的分析を可能にする組織を準備するための詳細な方法を提示する。これらの技術を実行するための標準的な方法を作成すると、このモデルの使用を拡大して、GIの炎症および創傷修復にとって潜在的に重要である未調査のメディエーターを研究することができます。