Lyssaviruses の検出のための普遍的な入れ子逆転写ポリメラーゼ連鎖反応の評価

狂犬病は、オーストラリアコウモリリッサウイルス属¹内のウイルスによって引き起こされる世界的な人獣共通病である。Lyssaviruses (ファミリー Rhabdoviridae) は、5つのタンパク質 (N、エピレギュリンタンパク (P)、マトリックスタンパク質 (M)、糖タンパク質 (G)、および大タンパクまたはポリメラーゼ (L) をコードする約 12 kb のゲノムを持つ単一陰性鎖 RNA ウイルスです。N 遺伝子、遺伝的距離、および抗原パターンのヌクレオチド配列に基づいて、lyssaviruses は、16種に分けられ、古典的な狂犬病ウイルス (RABV) および狂犬病関連ウイルス (RRV) を含む: ラゴスバットウイルス (LBV)、Duvenhage ウイルス (DUVV)、Mokola ウイルス (MOKV)、欧州バットオーストラリアコウモリリッサウイルス 1 (EBLV-1)、欧州バットオーストラリアコウモリリッサウイルス 2 (EBLV)、オーストラリアバットオーストラリアコウモリリッサウイルス (ABLV)、Aravan ウイルス (ARAV)、生駒ウイルス (IKOV)、Bokeloh バットオーストラリアコウモリリッサウイルス (BBLV)、Gannoruwa バットオーストラリアコウモリリッサウイルス (GBLV)、Irkut ウイルス (IRKV)、ホジャンドウイルス (KHUV)、西コーカサスバットウイルス (WCBV)、シモニバットウイルス (SHIBV)、およびリェイダバットオーストラリアコウモリリッサウイルス (LLEBV)².最近、2つの追加の lyssaviruses が同定されている: フィンランドのブラントのバット (Myotis brandtii) から分離した 2017³と台湾バットオーストラリアコウモリリッサウイルス (TWBLV) から孤立した KOTALAHTI バットオーストラリアコウモリリッサウイルス (KBLV) は、日本の pipistrelle (Pipistrellus abramus) 2016 年に台湾、中国で-2017⁴.

すべての哺乳類は狂犬病に感染しやすい。しかし、総病的病変または特定の臨床徴候はその同定を許可せず、診断は実験室⁵でのみ行うことができる。狂犬病診断のための最も広く使用されている方法は、WHO と OIE^5,6によって金本位として考えられている脂肪である。それにもかかわらず、脂肪は、劣化/autolyzed 脳組織サンプルで信頼性の低い結果を生成することができます。さらに、それは脳脊髄液 (CSF)、唾液および尿のような生物的液体の標本を測定するのに使用することができないそれにより antemortem 診断⁷の雇用を主に排除。代替の従来の診断試験は、狂犬病組織培養感染検査 (RTCIT) およびマウス接種試験 (MIT) など、数日⁶を必要とし、迅速な診断が必須である場合の大きな欠点である。

種々の分子診断試験 (例えば、RT-PCR によるウイルス RNA の検出、PCR −酵素結合免疫吸着アッセイ、「PCR − ELISA」、インサイチューハイブリダイゼーション、およびリアルタイム PCR) は、狂犬病診断のための迅速かつ高感度な技術として使用されている⁸.ルーチン狂犬病診断には OIE が推奨しており、heminested (hn) PCR は、地上動物が lyssaviruses⁵をすべて検出するための診断検査とワクチンの oie マニュアルに記載されています。ここでは、オーストラリアコウモリリッサウイルスネストされた RT-PCR を説明し、脂肪によって得られたものと同等またはそれを超えるすべての18オーストラリアコウモリリッサウイルス種の特異的および高感度検出を可能にする。この方法の原理は、標的 RNA の RT (オーストラリアコウモリリッサウイルス N 遺伝子の保存領域) を cDNA に、続いて2ラウンドの PCR による cDNA の増幅である。CDNA は、845 bp フラグメントを増幅するために、外部プライマーを含む第1ラウンド PCR を行います。次いで、第2ラウンド PCR は、第1ラウンド PCR 産物を鋳型として使用して、内部プライマーを有する 371 bp フラグメントを増幅する。PCR の2つのラウンドは、アッセイの感度を有意に増加させる。