Caenorhabditis Сито: Низкотехнологичные инструмент и методологии для сортировки мелких многоклеточных организмов

Нематоды червей Caenorhabditis elegans, является премьер модельный организм. В дополнение к простой и управляемый характер их выращивания в лаборатории их весь геном последовательности¹ и развития судьба каждой ячейки известен². Благодаря этим свойствам C. elegans является широко используется модель организма для генетических исследований. Однако наряду с этими полезными характеристиками приходят некоторые проблемы для исследователей. Вследствие их быстрого поколения время C. elegans населения можно быстро запустить из пищи и/или стать смешанных популяций с нескольких поколений и этапы развития представит сразу. Таким образом эксперименты, проведенные на твердых нематоды роста СМИ (НГМ) требуют исследователи переехать физически животных свежие пластины до источника бактериального пищи истощает и новые личинки развиваются. Это может быть утомительно, как частые передачи животных требуется для предотвращения экспериментальной популяций от став смешивается с потомства поколений. Тем не менее некоторые эксперименты требуют как большое количество животных и длительное время точек (например, ДНК или РНК добыча в зрелом возрасте). Это усугубляет проблемы точно поддерживать синхронизированные населения и передачи большого количества животных.

Нынешние методы передачи C. elegans культивированный на NGM комплектации или мытья животных от плиты к плита; химически лечения животных (например, с fluorodeoxyuridine ингибитор репликации ДНК или FUDR); или с помощью проточной цитометрии для сортировки животных в нескольких хорошо пластины. Сбор включает в себя использование ручной инструмент, с тонкий провод платины или ресниц, внесенные вручную передачи отдельных или нескольких животных^3,4. Этот метод является точной, но требует мастерства и времени и является ограничением для исследований с участием большого количества животных. Сбор мая также быть физически повреждения и напряженным для животных, потенциально подвергая лица неестественным и непоследовательных количество беспорядков и силы. Стиральная включает полоскания культуры блюдо с буферным раствором и передачи решения с животными через стеклянные пипетки Пастера новой культуры пластины. Этот метод является быстрым и эффективным, но не является точной, как несколько поколений и этапы развития животных передаются навалом. Химической обработки, такие как FUDR, может быть распущен в культивирования СМИ для предотвращения производства потомства через блокирование любых репликации ДНК и таким образом, развитие производства и яйцо гамет. В то же время эффективный, этот метод должен быть применен после развития созревания, чтобы не нарушить нормального развития процессов, и это означает, что все еще существует требование для передачи животных до его администрации³. Этот метод также влияет несколько сотовых сигнальные пути, что приводит к заметное воздействие на животных, как они возраста (например, продление срока службы или изменены proteostasis) в зависимости от штамма C. elegans используется^{5, 6,,78,9,10}. Проточная цитометрия методы автоматически сортировать и передать еще¹¹отдельных C. elegans от одной мульти хорошо пластины. Хотя этот метод является весьма эффективной и действенной, поток цитометрии оборудование чрезмерно дорогими и недоступными для многих исследователей. Альтернативой передачи животных является использование мутант моделей, которые температуры чувствительных, например Фер-15 и fem-1, которые становятся стерильные с регулировки температуры¹². Хотя с помощью мутанта животных является полезным в некоторых ситуациях, эти конкретные штаммов растут медленнее, чем одичал тип животных, и они полагаются на изменения генома, выступающей в качестве бедных представителей для старения или здоровые черви. Кроме того, зависимость от температуры перехода побудить стерильности приводит также в отсутствие статической окружающей среды, и изменения температуры легко доказано влияние генов выражения^{13,14, 15}. исследовательские группы опубликовали ранее методы, описывающие использование сетки для фильтрации C. elegans , размер¹⁶. Однако мы не смогли найти предыдущую работу, тестирование на любые изменения в общих результатов в отношении здоровья, которые могут быть связаны с использованием таких фильтров.

Таким образом, существует необходимость в C. elegans исследовательского сообщества для доступной, эффективного, быстрого и точного метода для передачи большого количества животных между пластинами культуры. Мы разработали улучшения, доступный кусок оборудования (название Caenorhabditis сито) и связанный протокол для его производства и эксплуатации, которая отвечает потребностям C. elegans научно-исследовательского сообщества. Здесь мы разделяем дизайн Caenorhabditis сито и методы для ее использования, и мы демонстрируем, что его использование не влияет на общее здоровье или любой стресс маркеры по сравнению с Стандартный ручной сбор и лечения с наиболее часто используемых ограничение рождаемости химических FUDR.