JoVE Journal > Immunology and Infection
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Türkçe

Automatically Generated
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Immunology and Infection

Boş hücre biyokimyasal Fluorometrik enzimatik tahlil yüksek yoğunluklu Lipoprotein Lipid peroksidasyon yüksek üretilen iş ölçümü için

Published: October 12, 2017
doi:
10.3791/56325
, , , , , ,
1University of California, Los Angeles, 2Centre for Biomedical Research,Burnet Institute, 3School of Health and Biomedical Sciences,RMIT University, 4Department of Infectious Diseases,Monash University

Summary

Biz burada bir Fluorometrik boş hücre biyokimyasal tahlil HDL-lipid peroksidasyon belirlenmesi için tarif. Bu hızlı ve tekrarlanabilir tahlil anlayışımız HDL fonksiyonunu kullanabilirsiniz insan hastalık katkıda bulunabilir ve büyük ölçekli çalışmalarda HDL işlevini belirlemek için kullanılabilir.

Abstract

Düşük yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL-C) kolesterolü aterosklerotik kardiyovasküler hastalık (CVD) en güçlü bağımsız negatif belirleyicileri bulunmaktadır. Yapısı ve fonksiyonu HDL-C yerine HDL daha doğru ateroskleroz tahmin. Ateroskleroz gibi inflamatuar Birleşik Devletleri, HDL fonksiyonu zarar HDL protein ve lipit kompozisyon değişiklikler oluşur. HDL işlevi genellikle deneyleri kolesterol sızma tahlil ama bu deneyleri gibi sayısız sakıncaları standardizasyon eksikliği var dayalı hücre tarafından belirlenir. Boş hücre deneyleri HDL işlevi hücre tabanlı deneyleri için kıyasla daha sağlam önlemler verebilir. HDL oksidasyon HDL işlevini bozar. HDL lipid peroksit taşımacılığında önemli bir rolü vardır ve yüksek miktarda lipid peroksitler anormal HDL fonksiyonuyla ilişkilidir. Lipid-sonda etkileşim ne zaman enzimatik olmayan floresan Spektrometre sonuçlarını yorumlama lipid oksidatif devlet ölçmek için deneyleri düşünülmelidir. Bu bize HDL disfonksiyon katkıda bulunan HDL lipid peroksit içeriği (HDLox) değerlendirmek için bir boş hücre biyokimyasal enzimatik yöntem geliştirmek için motive. Bu yöntem enzim horseradish peroksidaz (HRP) ve fluorochrome (kolesterol oksidaz) HDL-c mg başına lipid peroksit içeriği ölçmek Amplex kırmızı dayanır Burada bir iletişim kuralı fluorochrome reaktif kullanarak HDL-lipid peroksidasyon belirlenmesi describedfor. Tahlil değişkenlik deneysel koşullar sıkı Standartlar Kuruluşu tarafından azaltılabilir. Daha yüksek HDLox düşük HDL antioksidan işlevi ile ilişkili değerlerdir. Bu testin okuma doğrulanmış hücre tabanlı deneyleri, kalp-damar hastalıkları, sistemik inflamasyon, immün disfonksiyon ve ilişkili kardiyovasküler ve metabolik risk fenotipleri vekil önlemler çıktıları ile ilişkilidir. Bu teknik yaklaşım HDL işlevi insan hastalığında sistemik inflamasyon, oksidatif stres ve okside lipidler (ateroskleroz gibi) önemli bir rol olduğu değerlendirmek için sağlam bir yöntemdir.

Introduction

Aterosklerotik kardiyovasküler hastalık (CVD) ölüm dünya çapında1,2önde gelen nedenidir. Epidemiyolojik çalışmalar yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL) kolesterol seviyesinin düşük genellikle ters ateroskleroz1,2gelişimi için risk ile ilişkili olduğunu göstermiştir. Çeşitli çalışmalarda HDL1,2için bir atheroprotective rol desteklese de, hangi tarafından HDL başlama ve ilerleme ateroskleroz zayıflar karmaşık 3,4mekanizmadır. Bu nedenle, karmaşık yapısı ve fonksiyonu mutlak düzeyi yerine HDL ateroskleroz 5,6,7,8daha doğru tahmin sürülmüştür. Ateroskleroz gibi inflamatuar Birleşik Devletleri, HDL fonksiyonu zarar HDL protein ve lipit kompozisyon değişiklikler oluşur. Bunlar i) azaltmak onun kolesterol sızma potansiyel 9, II) azaltın anti-enflamatuar ve artış pro-inflamatuar proteinler HDL ilişkili 6,7, III) azalma antioksidan faktör düzeyleri ve etkinlik ve HDL Düşük yoğunluklu Lipoprotein (LDLox)10 ve IV oksidasyonu inhibe yeteneği) lipid hydroperoxide içerik ve Redoks etkinliği (HDLox)9,11artırın. HDL pleotropic işlevleri (örneğin, kolesterol sızma, antioksidan işlevi) çizimle sağlam deneyleri HDL-HDL-C klinikte belirlenmesi tamamlayıcı.

HDL işlevi genellikle kolesterol sızma tahlil8,12,13,14gibi hücre tabanlı yöntemler tarafından değerlendirilir. Bu yöntemi kullanılan hücre türleri, okuma rapor türünü, standardizasyon eksikliği ve trigliserit 7,15karıştırıcı etkileri açısından önemli heterojenite dahil olmak üzere önemli sınırlamaları vardır. Bu sakıncaları zorluklar büyük klinik çalışmalar16için poz. Boş hücre deneyleri HDL işlevi hücre tabanlı deneyleri için kıyasla daha sağlam önlemler verebilir. Kolesterol sızma HDL en önemli işlevlerinden biridir ama hücre tabanlı deneyleri tarafından yalnızca belirlenebilir. Proteomik17,18,19,20,21,22,23gibi HDL işlevini belirlemek için diğer yaklaşımlar 24 ve hücre tabanlı monosit kemotaksisi deneyleri HDL işlevi 17,22,25 değil standardize ve büyük ölçekli insan çalışmalarda kullanılamaz.

HDL önemli antioksidan atheroprotective etkisi5,6,7,8vardır. Antioksidan işlevi HDL, LDL huzurunda önceki hücre ücretsiz Fluorometrik deneyleri 26yılında belirlenmiştir. Biyokimyasal Fluorometrik yöntemlerin HDL antioksidan işlevi başlangıçta Mohamad Navab ve Alan Fogelman ve onların iş arkadaşları26tarafından geliştirilmiştir. Her ne kadar birçok insan çalışmaları-si olmak kullanılmış bu yöntemler HDL işlevi 17,18,19,20,21,22,23 belirlemek için ,24, lipid (HDL)-lipid (LDL) ve lipid fluorochrome etkileşimleri bu hücre ücretsiz enzimatik olmayan biyokimyasal deneyleri HDL işlevi27,28tekrarlanabilirlik sınırlamak.

Son faiz lipidler ve HDL 27,29,30içinde protein oksidasyon sonucu HDL oksidasyon fonksiyonel sonuçları üzerinde odaklanmıştır. Önceki çalışmalar göstermiştir bu oksidasyonunu HDL HDL işlevi 27,29,30bozar. HDL lipid peroksit taşımacılığında önemli bir rolü vardır ve yüksek miktarda lipid peroksitler anormal HDL fonksiyonuyla ilişkilidir. Böylece HDL lipid peroksit içeriği HDL işlevi 9,17,20,31 belirlemek için kullanılan ve HDL işlev7önceki deneyleri bilinen sınırlamaları verilen, 15,27,32, HDL lipid peroksit içeriği (HDLox) 32quantifies alternatif bir Fluorometrik yöntem geliştirdik. Bu yöntem enzim horseradish peroksidaz (HRP) ve fluorochrome (kolesterol oksidaz) HDL-C 32mg başına lipid peroksit içeriği ölçmek Amplex kırmızı temel alır. Tahlil biyokimyasal prensibi şekil 1‘ de gösterilen. Biz bu floresan dayalı yaklaşım önceki HDL işlevi deneyleri27,28sınırlamaları yok göstermiştir. Bu tahlil edilmiş daha rafine ve böylece büyük ölçüde insan çalışmaları bile cryopreserved plazma 32,33,34, , güvenilir bir şekilde kullanılabilir bizim laboratuarda standart 35 , 36 , 37 , 38 , 39 , 40 , 41 , 42. bu tahlil okuma doğrulanmış hücre tabanlı deneyleri, kalp-damar hastalıkları, sistemik inflamasyon, immün disfonksiyon ve ilişkili kardiyovasküler ve metabolik risk fenotipleri vekil önlemler çıktıları ile ilişkilidir 32 , 33 , 34 , 35 , 36 , 37 , 38 , 39. burada, HDL lipid peroksit içeriği (HDLox) ölçmek için bu basit ama güçlü yöntemi açıklanmaktadır. Bu tahlil bir aracı insan hastalığında HDL işlevinin rolü ile ilgili önemli araştırma soruları cevaplamak için sistemik inflamasyon, oksidatif stres ve okside lipidler (ateroskleroz gibi) önemli rol32olduğu kullanılabilir.

Protocol

tüm deneylerin insan biyolojik numuneleri kullanılarak etik onayıyla California Los Angeles, Los Angeles ve Alfred hastane insan Etik Komitesi, Melbourne Üniversitesi’nden gerçekleştirilmiştir. Not: fluorochrome HDL işlevi tahlil (bkz: tartışma) 32 birçok varyasyonu vardır. Aşağıda en tutarlı ve tekrarlanabilir sonuçlar verir Protokolü anlatacağız. Genel testin Şekil 2 ‘ deki. 1. numune i?…

Representative Results

Her HDL örneğinin 50 µL adım 7,3 olduğu gibi her kuyuya eklenir. 50 µL HRP çözüm 5 U/mL (0.25 U) sonra adım 7.5 olduğu gibi her kuyuya ekledi. Örnekleri adım 7,6 olarak 37 ° C’de 30 dakika inkübe. Fluorochrome reaktif 50 µL sonra adım 7,7 (300 µM son konsantrasyonu) olduğu gibi her kuyuya eklenir. (Karanlıkta) floresan okuma sonra her dakika bir floresan plaka okuyucu (530/590 nm filtreleri) ile 37 ° C’de 120 dakika içinde değerlendirilir. Boş, havuza alınan denet…

Discussion

Burada açıklanan protokol HDL işlev ateroskleroz ve insan hastalık rolü ile ilgili önemli araştırma soruları cevaplamak için güçlü bir araç sunar. Tahlil HDL lipid peroksit içeriği HDL-C enzimatik amplifikasyon (HRP) kullanarak mg başına quantifies. Bu yaklaşım kullanılan hücre türleri, okuma rapor türünü, standardizasyon eksikliği ve karıştırıcı etkileri açısından önemli heterojenite dahil olmak üzere önceki HDL işlevi deneyleri (örneğin kolesterol sızma tahlil) bilinen sınırl…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Yazarlar minnetle Dr Mohamad Navab, Alan Fogelman ve Srinivasa Reddy iş geliştirme, önceki yineleme bu modelin içindeki anahtar rolü için kabul. T.A.A. bir RMIT Üniversitesi-Şansölye Yardımcısı’nın doktora sonrası bursu tarafından desteklenir. AJ ve AA NHMRC proje desteği 1108792 tarafından desteklenir. TK tarafından desteklenmektedir NIH NIH K08AI08272, NIH/NCATS Grant # µL1TR000124 verir.

Materials

Experimental Reagents
HDL PEG (Polyethylene Glycol) Precipitating Reagent Pointe Scientific H7511
Amplex Red reagent. Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
DMSO. Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
Horse Radish Peroxidase (HRP) Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
Cholesterol Esterase. Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
 Cholesterol Reference standard Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
 Resorufin fluorescense Reference standard Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
5x Reaction Buffer. Life Technologies, Grand Island, NY A12216 Amplex Red Cholesterol Assay Kit.
• ≤–20°C • Desiccate
• Protect from light
HDL Cholesterol Automated Reagent ThermoFisher Scientific Co., San Jose, CA, USA. TR39601
Name Company Catalog Number Comments
Plasticware 
96-well plates (polypropylene, flat bottom, clear). Sigma Aldrich M0687
96-well plates (polypropylene, flat bottom, black). Sigma Aldrich M9936
1.5 mL Eppendorf tubes Eppendorf 0030 125.150
ClipTip 200, sterile ThermoFisher Scientific Co., San Jose, CA, USA. 14-488-058
Thermo Scientific Multichannel Pipettes, 8-channel, 125  ThermoFisher Scientific Co., San Jose, CA, USA.  14-387–955
Name Company Catalog Number Comments
Software 
Gen5 2.01 software Biotek, Vermont, USA NA
Name Company Catalog Number Comments
Equipment
Gen5 Plate reader Biotek, Vermont, USA NA
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gordon, D. J., Rifkind, B. M. High-density lipoprotein–the clinical implications of recent studies. N Engl J Med. 321, 1311-1316 (1989).
  2. Rubins, H. B., et al. Gemfibrozil for the secondary prevention of coronary heart disease in men with low levels of high-density lipoprotein cholesterol. Veterans Affairs High-Density Lipoprotein Cholesterol Intervention Trial Study Group. N Engl J Med. 341, 410-418 (1999).
  3. Voight, B. F., et al. Plasma HDL cholesterol and risk of myocardial infarction: a mendelian randomisation study. Lancet. 380, 572-580 (2012).
  4. Navab, M., Reddy, S. T., Van Lenten, B. J., Fogelman, A. M. HDL and cardiovascular disease: atherogenic and atheroprotective mechanisms. Nat.Rev Cardiol. 8, 222-232 (2011).
  5. Navab, M., et al. The double jeopardy of HDL. Ann Med. 37, 173-178 (2005).
  6. Navab, M., Reddy, S. T., Van Lenten, B. J., Anantharamaiah, G. M., Fogelman, A. M. The role of dysfunctional HDL in atherosclerosis. J Lipid Res. 50, S145-S149 (2009).
  7. Navab, M., Reddy, S. T., Van Lenten, B. J., Fogelman, A. M. HDL and cardiovascular disease: atherogenic and atheroprotective mechanisms. Nat Rev Cardiol. 8, 222-232 (2011).
  8. Patel, S., et al. Reconstituted high-density lipoprotein increases plasma high-density lipoprotein anti-inflammatory properties and cholesterol efflux capacity in patients with type 2 diabetes. J Am Coll Cardiol. 53, 962-971 (2009).
  9. Navab, M., et al. HDL and the inflammatory response induced by LDL-derived oxidized phospholipids. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 21, 481-488 (2001).
  10. Hayek, T., Oiknine, J., Brook, J. G., Aviram, M. Role of HDL apolipoprotein E in cellular cholesterol efflux: studies in apo E knockout transgenic mice. Biochem Biophys Res Commun. 205, 1072-1078 (1994).
  11. Van Lenten, B. J., et al. Anti-inflammatory HDL becomes pro-inflammatory during the acute phase response. Loss of protective effect of HDL against LDL oxidation in aortic wall cell cocultures. J Clin Invest. 96, 2758-2767 (1995).
  12. Undurti, A., et al. Modification of high density lipoprotein by myeloperoxidase generates a pro-inflammatory particle. J Biol Chem. 284, 30825-30835 (2009).
  13. Van Lenten, B. J., et al. Lipoprotein inflammatory properties and serum amyloid A levels but not cholesterol levels predict lesion area in cholesterol-fed rabbits. J Lipid Res. 48, 2344-2353 (2007).
  14. Watson, C. E., et al. Treatment of patients with cardiovascular disease with L-4F, an apo-A1 mimetic, did not improve select biomarkers of HDL function. J Lipid Res. 52, 361-373 (2011).
  15. Annema, W., et al. Impaired HDL cholesterol efflux in metabolic syndrome is unrelated to glucose tolerance status: the CODAM study. Sci Rep. 6, 27367 (2016).
  16. Movva, R., Rader, D. J. Laboratory assessment of HDL heterogeneity and function. Clin Chem. 54, 788-800 (2008).
  17. Charles-Schoeman, C., et al. Abnormal function of high-density lipoprotein is associated with poor disease control and an altered protein cargo in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 60, 2870-2879 (2009).
  18. Imaizumi, S., et al. L-4F differentially alters plasma levels of oxidized fatty acids resulting in more anti-inflammatory HDL in mice. Drug Metab Lett. 4, 139-148 (2010).
  19. Khera, A. V., et al. Cholesterol efflux capacity, high-density lipoprotein function, and atherosclerosis. N Engl J Med. 364, 127-135 (2011).
  20. Morgantini, C., et al. Anti-inflammatory and antioxidant properties of HDLs are impaired in type 2 diabetes. Diabetes. 60, 2617-2623 (2011).
  21. Patel, P. J., Khera, A. V., Jafri, K., Wilensky, R. L., Rader, D. J. The anti-oxidative capacity of high-density lipoprotein is reduced in acute coronary syndrome but not in stable coronary artery disease. J Am Coll Cardiol. 58, 2068-2075 (2011).
  22. Watanabe, J., et al. Proteomic profiling following immunoaffinity capture of high-density lipoprotein: association of acute-phase proteins and complement factors with proinflammatory high-density lipoprotein in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 64, 1828-1837 (2012).
  23. Watanabe, J., et al. Differential association of hemoglobin with proinflammatory high density lipoproteins in atherogenic/hyperlipidemic mice. A novel biomarker of atherosclerosis. J Biol Chem. 282, 23698-23707 (2007).
  24. Watanabe, J., et al. Hemoglobin and its scavenger protein haptoglobin associate with apoA-1-containing particles and influence the inflammatory properties and function of high density lipoprotein. J Biol Chem. 284, 18292-18301 (2009).
  25. Wang, X. S., et al. A sensitive and specific ELISA detects methionine sulfoxide-containing apolipoprotein A-I in HDL. J Lipid Res. 50, 586-594 (2009).
  26. Navab, M., et al. A cell-free assay for detecting HDL that is dysfunctional in preventing the formation of or inactivating oxidized phospholipids. J Lipid Res. 42, 1308-1317 (2001).
  27. Kelesidis, T., et al. A biochemical fluorometric method for assessing the oxidative properties of HDL. J Lipid Res. 52, 2341-2351 (2011).
  28. Kelesidis, T., et al. Effects of lipid-probe interactions in biochemical fluorometric methods that assess HDL redox activity. Lipids Health Dis. 11, 87 (2012).
  29. Navab, M., et al. Mechanisms of disease: proatherogenic HDL–an evolving field. Nat Clin Pract Endocrinol Metab. 2, 504-511 (2006).
  30. Navab, M., et al. The oxidation hypothesis of atherogenesis: the role of oxidized phospholipids and HDL. J Lipid Res. 45, 993-1007 (2004).
  31. Morgantini, C., et al. HDL lipid composition is profoundly altered in patients with type 2 diabetes and atherosclerotic vascular disease. Nutr Metab Cardiovasc Dis. 24, 594-599 (2014).
  32. Kelesidis, T., et al. A high throughput biochemical fluorometric method for measuring lipid peroxidation in HDL. PLoS One. 9, e111716 (2014).
  33. Kelesidis, T., Yang, O. O., Kendall, M. A., Hodis, H. N., Currier, J. S. Dysfunctional HDL and progression of atherosclerosis in HIV-1-infected and -uninfected adults. Lipids Health Dis. 12, 23 (2013).
  34. Zanni, M. V., et al. HDL redox activity is increased in HIV-infected men in association with macrophage activation and non-calcified coronary atherosclerotic plaque. Antivir Ther. 19, 805-811 (2014).
  35. Roberts, C. K., Katiraie, M., Croymans, D. M., Yang, O. O., Kelesidis, T. Untrained young men have dysfunctional HDL compared with strength-trained men irrespective of body weight status. J Appl Physiol (1985). , 1043-1049 (2013).
  36. Davidson, W. S., et al. Weight loss surgery in adolescents corrects high-density lipoprotein subspecies and their function. Int J Obes (Lond). 41, 83-89 (2017).
  37. Kelesidis, T., et al. Predictors of impaired HDL function in HIV-1 infected compared to uninfected individuals. J Acquir Immune Defic Syndr. , (2017).
  38. Kelesidis, T., et al. Oxidized lipoproteins are associated with markers of inflammation and immune activation in HIV-1 infection. AIDS. 30, 2625-2633 (2016).
  39. Kelesidis, T., et al. Changes in plasma levels of oxidized lipoproteins and lipoprotein subfractions with atazanavir-, raltegravir-, darunavir-based initial antiviral therapy and associations with common carotid artery intima-media thickness: ACTG 5260s. Antivir Ther. , (2016).
  40. Bhattacharyya, D. K., Adak, S., Bandyopadhyay, U., Banerjee, R. K. Mechanism of inhibition of horseradish peroxidase-catalysed iodide oxidation by EDTA. Biochem J. 295 (Pt 2), 281-288 (1994).
  41. Rees, M. D., Pattison, D. I., Davies, M. J. Oxidation of heparan sulphate by hypochlorite: role of N-chloro derivatives and dichloramine-dependent fragmentation. Biochem J. 391, 125-134 (2005).
  42. Mani, K., Cheng, F., Fransson, L. A. Heparan sulfate degradation products can associate with oxidized proteins and proteasomes. J Biol Chem. 282, 21934-21944 (2007).
  43. Finley, P. R., Schifman, R. B., Williams, R. J., Lichti, D. A. Cholesterol in high-density lipoprotein: use of Mg2+/dextran sulfate in its enzymic measurement. Clin Chem. 24, 931-933 (1978).
  44. von Schenck, H., Jacobsson, M. L. Prothrombin assay standardized with an international normalization ratio (INR): goal and reality. Clin Chem. 33, 342 (1987).
  45. de Kok, J. B., et al. Normalization of gene expression measurements in tumor tissues: comparison of 13 endogenous control genes. Lab Invest. 85, 154-159 (2005).
  46. Stocker, R., Keaney, J. F. Role of oxidative modifications in atherosclerosis. Physiol Rev. 84, 1381-1478 (2004).
  47. Holzer, M., et al. Aging affects high-density lipoprotein composition and function. Biochim Biophys Acta. 1831, 1442-1448 (2013).
  48. Amundson, D. M., Zhou, M. Fluorometric method for the enzymatic determination of cholesterol. J Biochem Biophys Methods. 38, 43-52 (1999).
  49. Mishin, V., Gray, J. P., Heck, D. E., Laskin, D. L., Laskin, J. D. Application of the Amplex red/horseradish peroxidase assay to measure hydrogen peroxide generation by recombinant microsomal enzymes. Free Radic Biol Med. 48, 1485-1491 (2010).
  50. Lombardi, A., et al. UCP3 translocates lipid hydroperoxide and mediates lipid hydroperoxide-dependent mitochondrial uncoupling. J Biol Chem. 285, 16599-16605 (2010).
  51. Bhattacharya, A., et al. Denervation induces cytosolic phospholipase A2-mediated fatty acid hydroperoxide generation by muscle mitochondria. J Biol Chem. 284, 46-55 (2009).
  52. Havel, R. J., Eder, H. A., Bragdon, J. H. The distribution and chemical composition of µLtracentrifugally separated lipoproteins in human serum. J Clin Invest. 34, 1345-1353 (1955).
  53. Dyerberg, J. Comments on the quantitation of lipoproteins by agarose-gel electrophoresis. Clin Chim Acta. 61, 103-104 (1975).
  54. Warnick, G. R., Cheung, M. C., Albers, J. J. Comparison of current methods for high-density lipoprotein cholesterol quantitation. Clin Chem. 25, 596-604 (1979).
  55. Demacker, P. N., Hijmans, A. G., Vos-Janssen, H. E., van’t Laar, A., Jansen, A. P. A study of the use of polyethylene glycol in estimating cholesterol in high-density lipoprotein. Clin Chem. 26, 1775-1779 (1980).
  56. Izzo, C., Grillo, F., Murador, E. Improved method for determination of high-density-lipoprotein cholesterol I. Isolation of high-density lipoproteins by use of polyethylene glycol 6000. Clin Chem. 27, 371-374 (1981).
  57. Patel, P. J., Khera, A. V., Wilensky, R. L., Rader, D. J. Anti-oxidative and cholesterol efflux capacities of high-density lipoprotein are reduced in ischaemic cardiomyopathy. Eur J Heart Fail. 15, 1215-1219 (2013).
  58. Roche, M., Rondeau, P., Singh, N. R., Tarnus, E., Bourdon, E. The antioxidant properties of serum albumin. FEBS Lett. 582, 1783-1787 (2008).
  59. Panzenbock, U., Kritharides, L., Raftery, M., Rye, K. A., Stocker, R. Oxidation of methionine residues to methionine sulfoxides does not decrease potential antiatherogenic properties of apolipoprotein A-I. J Biol Chem. 275, 19536-19544 (2000).

Tags

Cell-freeBiochemicalFluorometricEnzymatic AssayHigh-throughputLipid PeroxidationHigh Density LipoproteinHDL FunctionCardiovascular DiseaseMetabolic AbnormalitiesInflammatory DiseasesHDL-CHDLoxPooled Quality ControlHDL Cholesterol Precipitating ReagentHRPFluorochrome ReagentDMSO

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Sen Roy, S., Nguyen, H. C. X., Angelovich, T. A., Hearps, A. C., Huynh, D., Jaworowski, A., Kelesidis, T. Cell-free Biochemical Fluorometric Enzymatic Assay for High-throughput Measurement of Lipid Peroxidation in High Density Lipoprotein. J. Vis. Exp. (128), e56325, doi:10.3791/56325 (2017).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image