Ячейки бесплатно биохимических флуориметрический ферментативные Assay высок объём измерения перекисного окисления липидов в липопротеинов высокой плотности

Атеросклеротические сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) является ведущей причиной смерти во всем мире^1,2. Эпидемиологические исследования показали, что низкие уровни холестерина липопротеинов высокой плотности (HDL), как правило, обратно, связанные с риском развития атеросклероза^1,2. Хотя некоторые исследования поддерживают atheroprotective роль для ЛПВП^1,2, механизм, по которому HDL ослабляет посвящения и прогрессирования атеросклероза является комплекс ^3,4. Таким образом было высказано предположение о том, что сложная структура и функции ЛПВП, а не абсолютный уровень может более точно предсказать атеросклероза ^5,6,,78. Несколько HDL белков и липидов композиционные которые ухудшить HDL функции происходят изменения в воспалительных заболеваниях, таких как атеросклероз. Эти i) сократить ее уровень холестерина измеряем потенциальных ⁹, ii) уменьшить противовоспалительный и повышение ЛПВП связанные pro воспалительные белки ^6,7, iii) снижение антиоксидантной фактор уровней и деятельности и HDL способностью ингибировать окисления липопротеидов низкой плотности (LDLox)¹⁰ и iv) увеличить липидов гидропероксид содержание и окислительно-восстановительной деятельности (HDLox)^9,11. Надежные анализы, которые оценивают pleotropic функции HDL (например холестерин измеряем, Антиоксидантная функция) может дополнить определение HDL-HDL-C в клинике.

HDL функция обычно оценивается на основе ячеек методами, такими как холестерин измеряем пробирного^8,12,,1314. Эти методы имеют основные ограничения, включая значительную гетерогенность в отношении типов клеток используется, тип индикации сообщили, отсутствие стандартизации и накладывающееся воздействие триглицеридов ^7,15. Эти недостатки представляют трудности для крупных клинических исследований¹⁶. Ячейки бесплатные анализы могут дать более надежные меры HDL функции по сравнению с анализов на основе ячеек. Измеряем холестерина является одним из наиболее важных функций ЛПВП, но он только может определяться на основе ячеек анализов. Другие подходы для определения HDL функции, такие как протеомики^{17,18,19,20,21,,2223, 24} и хемотаксис анализов на основе ячеек Моноцит HDL функция ^17,,2225 не были стандартизированы и не может использоваться в крупных масштабах человеческих исследований.

HDL имеет значительные антиоксидантными atheroprotective эффект^5,6,,78. Антиоксидантная функция HDL определил присутствии ЛПНП в предыдущей ячейке бесплатно флуориметрический анализов ²⁶. Эти биохимические методы флуориметрический HDL антиоксидантные функции были первоначально разработан Мохамад Наваб и Алан Фогельман и их коллег²⁶. Хотя многие человеческие исследования использовали эти методы для определения HDL функция ^{17,18,19,20,21,22,23 ,24}, липидов (HDL)-липидов (ЛПНП) и липидов флюрохром взаимодействия может ограничить воспроизводимость этих клеток бесплатно неферментативного биохимических анализов HDL функция^27,28.

Последнее время интерес была сосредоточена на функциональных последствий HDL окисления, что является результатом окисления липидов и белков в пределах HDL ^27,29,30. Предыдущие исследования показали, что окисление HDL ухудшает HDL функция ^27,29,30. HDL имеет главную роль в липидной перекиси транспорта и высокое количество перекисей липидов связано с ненормальной функции HDL. Таким образом могут быть использованы для определения HDL функция ^9,17,,2031 и учитывая известные ограничения предыдущих анализов HDL функция^{7, HDL липидной перекиси содержание 15,27,32}, мы развитых флуориметрический альтернативный метод, который дает количественную оценку HDL липидной перекиси содержание (HDLox) ³². Этот метод основан на фермента пероксидазы (ПХ) и флюрохром красный Amplex, которые могут количественно охарактеризовать (без холестерина оксидаза) перекиси содержание липидов на мг HDL-C- ³². Биохимический принцип анализа показано на рисунке 1. Мы показали, что этот подход на основе флуоресценции не имеют ограничений предварительного HDL функция анализов^27,28. Этот assay далее уточнены и стандартизированы в нашей лаборатории, так, чтобы он надежно может использоваться в крупных масштабах человеческой исследований, даже с криоконсервированных плазменный ^{32,33,34, 35 , 36 , 37 , 38 , 39 , 40 , 41 , 42}. Индикация этот assay ассоциируется с отсчетов проверенных анализов на основе ячеек, суррогатных мер сердечно-сосудистых заболеваний, внутрирастительного воспаления, иммунной дисфункции и связанного с ними риска сердечно-сосудистой и метаболической фенотипов ^{32 , 33 , 34 , 35 , 36 , 37 , 38 , 39}. здесь мы опишем этот простой, но надежный метод для измерения HDL липидной перекиси содержания (HDLox). Этот assay может использоваться как инструмент, ответить на вопросы важных исследований относительно роли функции HDL заболеваний человека где внутрирастительного воспаления, оксидативный стресс и окисленных липидов имеют ключевую роль (например, атеросклероз)³².