الخلية الحرة البيوكيميائية المقايسة الانزيمية فلوروميتريك لقياس الفائق وبيروكسيد في البروتين الدهني العالي الكثافة

أمراض القلب والأوعية الدموية تصلب الشرايين (الرسوم التعويضية) هو السبب الرئيسي للوفاة في جميع أنحاء العالم^1،2. وقد أظهرت الدراسات الوبائية أن انخفاض مستويات البروتين الدهني الكثافة (HDL) الكوليسترول عموما ترتبط عكسيا مع المخاطر لتطوير تصلب الشرايين^1،2. على الرغم من اعتماد العديد من الدراسات بدور أثيروبروتيكتيفي الحميد^1،2، هو الآلية التي يخفف الحميد بدء وتطور تصلب الشرايين معقدة ^3،4. ومن ثم، اقترح أن هيكل معقد ووظيفة الحميد بدلاً من المستوى المطلق قد التنبؤ أكثر دقة بتصلب الشرايين ^5،6،،من⁷⁸. تحدث عدة الحميد البروتين والدهن التغييرات التركيبية التي تنال من الدالة الحميد في الولايات الملتهبة مثل تصلب الشرايين. هذه ط) خفض بنسبة الكولسترول في الدم افلوكس المحتملة ⁹، ثانيا) إنقاص للالتهابات وزيادة البروتينات برو-الالتهابات المرتبطة بالحميد ^6،7، ثالثا) انخفاض مستويات مضادات الأكسدة عامل والنشاط و HDLs القدرة تمنع أكسدة “البروتين الدهني منخفض الكثافة” (لدلوكس)¹⁰ والرابع) زيادة الدهن هيدرو فوق أكسيد تركيز المحتوى والأكسدة النشاط (هدلوكس)^9،11. فحوصات قوية أن تقييم وظائف بليوتروبيك الحميد (مثل efflux الكولسترول، الدالة المضادة للأكسدة) قد تكمل تصميم الحميد-HDL-C في العيادة.

هو عادة بالأساليب المستندة إلى الخلية مثل الكوليسترول efflux المقايسة^8،12،،من¹³¹⁴تقييم الدالة الحميد. هذه الأساليب والقيود الرئيسية بما في ذلك تغايرية مهمة فيما يتعلق بأنواع الخلايا المستخدمة ونوع قراءات أفادت، والافتقار إلى التوحيد وآثار الخلط الثلاثية ^7،15. هذه العيوب تثير صعوبات لدراسات سريرية كبيرة¹⁶. فحوصات مجانية من الخلية قد تعطي تدابير أقوى الحميد وظيفة مقارنة بفحوصات يستند إلى الخلية. افلوكس نسبة الكولسترول في الدم واحدة من أهم وظائف الحميد ولكن فإنه لا يمكن تحديده إلا بفحوصات يستند إلى الخلية. نهج أخرى لتحديد دالة الحميد مثل البروتيوميات^17،،من^{1819،20،21،،}من^{2223، 24} وفحوصات إنزيمية الوحيدات يستند إلى الخلية الحميد الدالة ^17،،من²²²⁵ لا تم توحيد ولا يمكن استخدامها في الدراسات الإنسانية الواسعة النطاق.

وقد هدل الهامة المضادة للأكسدة أثيروبروتيكتيفي تأثير^5،6،،من⁷⁸. وقد تحدد وظيفة المضادة للأكسدة الكوليسترول الجيد حضور LDL في السابق الخلية الحرة فحوصات فلوروميتريك ²⁶. هذه الأساليب فلوروميتريك البيوكيميائية الحميد مضادات الأكسدة مهمة وضعت أصلاً نافاب محمد والن فوغلمان و الزملاء على²⁶. على الرغم من أن العديد من الدراسات البشرية قد استخدمت هذه الأساليب لتحديد الحميد الدالة ^17،،من^1819،،من^{2021،22،23 ،24}، الدهون (الكوليسترول الجيد)-المادة الدهنية (LDL) والتفاعلات fluorochrome الدهن قد تحد من إمكانية تكرار نتائج لهذه الخلية الحرة غير الانزيمية البيوكيميائية فحوصات الحميد الدالة^27،28.

الفائدة الأخيرة ركزت على العواقب الوظيفية لأكسدة الكوليسترول الجيد هو نتيجة لأكسدة كل من الدهون والبروتينات داخل الحميد ^27،،من²⁹³⁰. وقد أظهرت الدراسات السابقة أن أكسدة الكوليسترول الجيد يضعف الحميد الدالة ^27،،من²⁹³⁰. الحميد دوراً رئيسيا في النقل بيروكسايد المادة الدهنية وهي المتعلقة بكمية عالية من الدهون الأكاسيد الفوقية الشاذ الحميد الدالة. وبالتالي يمكن استخدامها لتحديد الحميد الدالة ^9،17،،من²⁰³¹ الحميد محتوى الدهون بيروكسايد ونظرا لمحدودية المعروفة لفحوصات مسبقة الحميد الدالة^{7، 15،،}من²⁷³²، قمنا بتطوير أسلوب بديل فلوروميتريك التي يوضحها الحميد دهن محتوى بيروكسايد (هدلوكس) ³². يستند هذا الأسلوب الإنزيم الفجل البيروكسيديز (HRP) و fluorochrome Amplex الأحمر التي يمكن تحديدها كمياً (بدون الكوليسترول أوكسيديز) محتوى الدهن بيروكسايد كل ملغ من الكوليسترول الجيد-ج ³². البيوكيميائية مبدأ المقايسة يرد في الشكل 1. وقد أظهرنا أن هذا النهج القائم على الأسفار ليس لديه قيود مسبقة الحميد الدالة فحوصات^27،28. تم زيادة صقل هذا التحليل وموحدة في المختبر حيث أنه يمكن استخدامه موثوق في الدراسات الإنسانية واسعة النطاق حتى مع البلازما cryopreserved ^32،،من^{3334، 35 , 36 , 37 , 38 , 39 , 40 , 41 , 42}-قراءات من هذا الإنزيم يرتبط مع قراءات لفحوصات المستندة إلى خلية تم التحقق من صحتها، تدابير بديلة لأمراض القلب والأوعية الدموية والتهاب النظامية والخلل المناعي وتعمل يرتبط بها من مخاطر القلب والأوعية الدموية والايض ^{32 , 33 , 34 , 35 , 36 , 37 , 38 , 39}-هنا، يمكننا وصف هذا الأسلوب بسيطة، لكنها قوية لقياس الدهن الحميد بيروكسايد المحتوى (هدلوكس). يمكن استخدام هذا التحليل كأداة للإجابة على الأسئلة البحثية الهامة فيما يتعلق بالدور وظيفة الكوليسترول الجيد في الأمراض البشرية فيها التهاب النظامية والأكسدة والدهون المؤكسدة لها دور رئيسي (مثل تصلب الشرايين)³².