Isolamento di cellule endoteliali progenitrici dal sangue del cordone ombelicale umano

Parecchi ricercatori hanno studiato le caratteristiche e le potenzialità di umano EPCs^{5,10,11,12,13}. EPC possono essere descritto come fare circolare le cellule che hanno la capacità di aderire al tessuto endoteliale nei siti di ipossia, ischemia, lesioni o di formazione del tumore e contribuiscono alla formazione di nuove strutture vascolari^4,14. Loro coinvolgimento osservato nella neovascolarizzazione, sotto forma di vasculogenesi postnatale, ha condotto ad una comprensione della patofisiologia di queste cellule e il loro uso in applicazioni terapeutiche^{4,15, 16}. il numero di EPCs in un individuo è stato indicato per essere correlati con patologia cardiovascolare^{9,15,16,17,18,19 ,20}. Altri studi hanno anche differenziato EPCs in un fenotipo fibroblasto-come valvola e proposto che queste cellule potrebbero essere utilizzate per l’ingegneria dei tessuti cuore valvole^7,21.

Le molecole di superficie determinata cella necessari per isolare EPCs non sono stati chiaramente identificate a causa di discrepanze tra le indagini⁴. L’adesione delle MNCs per una certa matrice, con l’esposizione a una varietà di condizioni di coltura, è stata eseguita da diversi gruppi^1,17,22,23, suggerendo che presunto EPCs può visualizzare le proprietà fenotipiche differenti. Queste proprietà includono la mancanza di abilità phagocytotic, la formazione del tubo in Matrigel e l’assorbimento delle lipoproteine a bassa densità di Dil-acetilato. L’alta clonogenic e potenziale proliferativo sono due proprietà con cui EPCs può essere gerarchizzato⁵. EPCs possono anche formare in vitro i tubuli quando cocultured con fibroblasti di polmone fetale umano⁴. Queste cellule sono conosciute per esprimere gli indicatori di superficie delle cellule endoteliali e di condividere alcuni dei marcatori ematopoietici^13,24,25. I marcatori espressi positivamente che sono ampiamente accettati per la fenotipizzazione EPCs sono CD31, CD34, fattore di crescita endoteliale vascolare receptor 2 (VEGFR2), von Willebrand Factor (vWF), CD133, c-Kit e vascolare endoteliale caderina (VE-caderina)^{4 , 18}. non sono considerate essere EPCs a causa della loro limitata capacità proliferativa potenziali, di fagocitare batteri e incapacità di formare de novo umano cellule che co-esprimono CD90, CD45, CD14, CD115 o l’actina alfa-liscia del muscolo (α-SMA) vasi in vivo^4,7. Questo articolo descrive un protocollo modificato per l’isolamento di cellule progenitrici endoteliali dal sangue del cordone ombelicale umano senza la necessità di qualsiasi cella ordinamento protocolli. In questo articolo abbiamo usato CD31, CD34 e VEGFR2 come gli indicatori positivi, con α-SMA come indicatore negativo.

In questo articolo, vi proponiamo un metodo di isolamento e coltura delle cellule progenitrici endoteliali da sangue del cordone ombelicale senza cella ordinamento utilizzando specializzato supplementato crescita endoteliale con fattori di crescita (EGM). Questo EGM contiene fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF) e fattore di crescita del fibroblasto (FGF), che migliorano la sopravvivenza, la proliferazione e la migrazione di cellule endoteliali²⁶. Include anche l’acido ascorbico, che è responsabile del mantenimento della morfologia di ciottoli delle cellule; 1 fattore di crescita insulino-simile (IGF-1), che fornisce angiogenici e funzione migratori; e l’eparina, che provoca una migliore stabilità a lungo termine dei fattori di crescita nel medio²⁶. Altri fattori di crescita aggiunti al terreno di coltura delle cellule endoteliali comprende il completamento con fattore di crescita epidermico (EGF), che aiuta a stimolare la proliferazione delle cellule e differenziazione e idrocortisone, che sensibilizza le cellule per EGF²⁶ . Indichiamo che l’utilizzo di questo mezzo di crescita specifici rendimenti più alti numeri di EPCs rispetto al medio basale endoteliale (EBM) o per volta Eagle Medium (DMEM di Dulbecco).