Isolation des Pericytes de Type I et de Type II des Muscles Squelets de la Souris

La dystrophie musculaire est un trouble musculaire-dégénératif qui n'a jusqu'ici pas de traitements efficaces. Le développement de thérapies qui favorisent la régénération tissulaire a toujours été d'un grand intérêt. La régénération et la réparation des tissus après dommages dépendent des cellules souches / cellules progénitrices résidentes ¹ . Les cellules satellites sont des cellules précurseurs myogènes actives qui contribuent à la régénération musculaire ^{2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7} . Leur utilisation clinique, cependant, est entravée par leur migration limitée et leur faible taux de survie après l'injection, ainsi que par leur diminution de la capacité de différenciation après l' amplification in vitro ^{8 , 9 , 10 , 11} . En plus de satelliLes muscles squelettiques contiennent également de nombreuses autres populations de cellules avec un potentiel myogénique ^{12 , 13 , 14 , 15 , 16} , telles que les cellules interstitielles positives du récepteur du facteur de croissance dérivées des plaquettes (PDGFRβ). Il existe des preuves montrant que les cellules PDGFRβ ⁺ dérivées de muscle peuvent se différencier en cellules myogènes et améliorer la pathologie musculaire et la fonction ^{14 , 17 , 18 , 19 , 20} . Le PDGFRβ marque principalement les pericytes ²¹ , qui sont des cellules périvasculaires avec une pluripotence ^{22 , 23} . En plus de PDGFRβ, de nombreux autres marqueurs, y compris Neuron-Glial 2 (NG2) et CD146, sont également utilisés pour iDentify pericytes ²¹ . Il convient toutefois de noter qu'aucun de ces marqueurs n'est spécifique à un pericyte ²¹ . Des études récentes ont révélé deux sous-types de percytes musculaires, appelés type I et type II, qui expriment différents marqueurs moléculaires et réalisent des fonctions distinctes ^{19 , 24 , 25} . Biochimiquement, les pericytes de type I sont NG2 ⁺ Nestin ^– , tandis que les pericytes de type II sont NG2 ⁺ Nestin ^{+ 19 , 24} . Fonctionnellement, les pericytes de type I peuvent subir une différenciation adipogène, contribuant à l'accumulation de graisse et / ou à la fibrose, tandis que les pericytes de type II peuvent se différencier le long de la voie myogénique, ce qui contribue à la régénération musculaire ^{19 , 24 , 25} . Ces résultats démontrent que: (1) les pericytes de type I peuvent bE ciblés dans le traitement des troubles dégénératifs gras / fibrose, et (2) les pericytes de type II ont un grand potentiel thérapeutique pour la dystrophie musculaire. Une étude et une caractérisation plus poussées de ces populations nécessitent un protocole d'isolement qui permet de séparer les pericytes de type I et de type II à un haut niveau de pureté.

À l'heure actuelle, l'isolement des sous-populations de péricyte repose sur les souris doublement transgéniques NG2-DsRed et Nestin-GFP ^{19 , 24} . La disponibilité des souris NG2-DsRed et la qualité de la plupart des anticorps NG2 limitent l'utilisation généralisée de cette méthode. Étant donné que tous les pericytes NG2 ⁺ expriment également le PDGFRβ dans les muscles squelettiques ^{19 , 20 , 24} , nous supposons que NG2 peut être remplacé par PDGFRβ pour l'isolement des pericytes et de leurs sous-populations. Ce travail décrit un protocole basé sur FACS quiUtilise la coloration PDGFRβ et le signal Nestin-GFP. Cette méthode est moins exigeante pour les chercheurs parce que: (1) il ne nécessite pas l'arrière-plan NG2-DsRed et (2) il utilise des anticorps PDGFRβ disponibles dans le commerce, qui sont bien caractérisés. En outre, il permet l'isolement simultané de pericytes de type I et de type II à haute pureté, ce qui permet d'approfondir la recherche sur la biologie et le potentiel thérapeutique de ces sous-populations de pericyte. Après la purification, ces cellules peuvent être cultivées en culture, et leurs morphologies peuvent être visualisées. Ce travail montre également que les pericytes de type I et de type II isolés en utilisant cette méthode, comme ceux purifiés à partir de souris doublement transgéniques, sont adipogènes et myogènes, respectivement.