Isolamento delle pericelle di tipo I e II di muscoli scheletrici del mouse

La distrofia muscolare è un disturbo muscolare-degenerativo che non ha finora trattamenti efficaci. Lo sviluppo di terapie che promuovono la rigenerazione dei tessuti è sempre stato di grande interesse. La rigenerazione tissutale e la riparazione dopo danni dipendono da cellule staminali residui / cellule progenitrici ¹ . Le cellule satellitari sono impegnate da cellule precursori myogeniche che contribuiscono alla rigenerazione muscolare ^{2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7} . Tuttavia, il loro utilizzo clinico è ostacolato dalla loro limitata migrazione e dal basso tasso di sopravvivenza dopo l'iniezione, nonché dalla loro diminuita capacità di differenziazione dopo l'amplificazione in vitro ^{8 , 9 , 10 , 11} . Oltre ai satellitiLe cellule ei muscoli scheletrici contengono anche molte altre popolazioni cellulari con potenzialità myogenica ^{12 , 13 , 14 , 15 , 16} come le cellule interstiziali posizionali di fattore di crescita del recettore beta-beta (PDGFRβ) derivato dalle piastrine. Ci sono prove che dimostrano che le cellule PDGFRβ ⁺ derivate dal muscolo sono in grado di differenziarsi in cellule miogeniche e migliorare la patologia muscolare e la funzione ^{14 , 17 , 18 , 19 , 20} . PDGFRβ prevalentemente etichetta periciti ²¹ , che sono cellule perivascolari con pluripotenza ^{22 , 23} . Oltre al PDGFRβ, molti altri marcatori, tra cui Neuron-Glial 2 (NG2) e CD146, sono utilizzati anche per iDentify pericytes ²¹ . Va comunque osservato che nessuno di questi marcatori è specifico per cicli ²¹ . Recenti studi hanno rivelato due sottotipi di periciti muscolari, chiamati tipo I e tipo II, che esprimono diversi marcatori molecolari e svolgono funzioni distinte ^{19 , 24 , 25} . Biochimicamente, le pericelle di tipo I sono NG2 ⁺ Nestin, mentre le pericelle di tipo II sono NG2 ⁺ Nestin ^{+ 19 , 24} . Funzionariamente, i periciti di tipo I possono subire differenziazione adipogenica, contribuendo all'accumulo di grassi e / o alla fibrosi, mentre i periciti di tipo II possono differenziarsi lungo il percorso miocogenico, contribuendo alla rigenerazione muscolare ^{19 , 24 , 25} . Questi risultati dimostrano che: (1) i periciti di tipo I possono bE destinato al trattamento di disturbi degenerativi grassi / fibrosi, e (2) le pericie di tipo II hanno un grande potenziale terapeutico per la distrofia muscolare. Ulteriori indagini e caratterizzazione di queste popolazioni richiedono un protocollo di isolamento che consente la separazione dei periciti di tipo I e tipo II ad un alto livello di purezza.

Attualmente, l'isolamento delle sottopopolazioni pericite si basa sui topi doppi transgenici NG2-DsRed e Nestin-GFP ^{19 , 24} . La disponibilità di topi NG2-DsRed e la qualità della maggior parte degli anticorpi NG2 limitano l'uso diffuso di questo metodo. Dato che tutti i periciti NG2 ⁺ esprimono PDGFRβ nei muscoli scheletrici ^{19 , 20 , 24} , ipotizziamo che NG2 può essere sostituito da PDGFRβ per l'isolamento delle periciti e delle loro subpopulazioni. Questo lavoro descrive un protocollo basato su FACS cheUtilizza la colorazione PDGFRβ e il segnale Nestin-GFP. Questo metodo è meno impegnativo per gli investigatori perché: (1) non richiede lo sfondo NG2-DsRed e (2) utilizza gli anticorpi PDGFRβ commercialmente disponibili, ben caratterizzati. Inoltre, consente l'isolamento simultaneo di periciti di tipo I e di tipo II ad alta purezza, permettendo di approfondire la biologia e il potenziale terapeutico di queste sottopopolazioni pericite. A seguito della purificazione, queste cellule possono essere coltivate in coltura e le loro morfologie possono essere visualizzate. Questo lavoro mostra anche che i periciti di tipo I e II tipo isolati utilizzando questo metodo, come quelli purificati da topi doppi transgenici, sono rispettivamente adipogenici e miogenici.