ゼブラフィッシュの開発の長期イメージングのための多彩な取り付け方法

後部ボディ伸びが胚体軸の大部分を形成するように延びていることにより、胚発生に不可欠なプロセスです。これは、複数の細胞の挙動は、個々の組織のレベルでの形態形成を生成するために協調的に作用することにより、複雑な形態形成過程の一例です。これらの差動組織変形は、その後、構造全体のレベルで後部本体の伸長を生成するために一緒に働きます。これらのプロセスが制御され、現像時に調整されている方法を理解するために、我々は（分子、細胞、細胞集団と組織のレベルでIE）複数のスケールで、これらのプロセスに従うことができなければならず、全体の構造の形態形成に直接これを関連付けること。

その光学的透明性と小さなサイズは、最小侵襲性光イメージングのアプリケーションを可能にするようゼブラフィッシュの胚は、LIVによく適して近づいイメージング後部本体の伸長のために理想的です電子イメージング。 ¹これは、分子のレベル^、2単セルで^、3と間組織行動^、4だけでなく、細胞集団全体の臓器のレベルで後部本体の開発に光を当てるしている最近の一連の刊行物によって証明されています。 ⁵

このような共焦点、多光子顕微鏡法および選択的平面照明顕微鏡（SPIM）などの高度なイメージング技術は、光毒性および光退色の効果が低下した発生過程の長期イメージングを可能にしています。顕微鏡への転送時および取得時に正しい向きでサンプルを維持するために1）十分な支持の成長を可能にするために、サンプルの移動2）十分な自由：ライブのサンプルの実装のための堅牢な技術は、3つの目標を達成するために必要とされますその通常のdevelに影響を与えることなく、後部ボディ領域発、そして最後に3）多様なイメージング・セットアップにイメージングを可能にする実装方法の汎用性にある程度。

このプロトコルは、ゼブラフィッシュD.レリオの開発を撮像するための実装技術を紹介します。この技術は、細長く、正常に発育する後部ボディ領域を残して、ヘッドと卵黄嚢の領域をほぼ完全に、アガロース中に含まれるように胚をマウントすることを含みます。このように、それはまた、アガロース、標準の光画像化技術による画像化を可能にするように開発身体の他の領域の長期イメージングのための適切な方法です。代替の向きで胚をマウントすることも可能であるが、このプロトコルは、横方向の向きで胚の取り付けを示しています。さらに、直立反転および垂直光シート顕微鏡のセットアップのための方法を適応させる方法を紹介します。