Summary

Мышиные Полная толщина кожи Трансплантация

Published: January 02, 2017
doi:

Summary

Мышиные полная толщина трансплантация кожи является хорошо известной моделью для изучения отказа в установке аллоиммунная. Здесь мы предоставляем учебник каждого шага, участвующих в выполнении / с BALB -> C57BL / 6 всю толщину трансплантата кожи.

Abstract

Мышиные полная толщина трансплантация кожи является хорошо создана в естественных условиях модель для изучения аллоиммунная реакции и отторжения трансплантата. Несмотря на ограниченное применение для человека, трансплантация кожи у мышей широко применяется для исследования трансплантации. Процедура проста в освоении и выполнять, и это не требует тонких методов микрохирургических, ни интенсивное обучение. Кроме того, отторжение трансплантата в этой модели имеет место в очень воспроизводимым иммунологической реакции и легко контролировать путем непосредственного осмотра и пальпации. Кроме того, вторичная трансплантация кожи с донорскими соответствием или третьей стороной кожи трансплантаты могут быть выполнены на более сложные модели трансплантации в качестве альтернативы и несложный метод оценки донорского-специфической толерантности. Осложнения низкие, и в общем случае ограничено анестезии передозировки или респираторного дистресс-синдрома после процедуры. отказ привитые, с другой стороны, происходит обычно в результате плохой подготовки гркормовой части, неправильное положение в привитой постели, или несоответствующее размещение повязки. В этой статье мы приводим протокол для полной толщины пересадки кожи у мышей и описывают важные шаги, необходимые для успешной процедуры.

Introduction

Трансплантация органов является методом выбора при лечении больных с недостаточностью терминальной стадии органов, а также исходы значительно улучшилось с прогрессом в области хирургических процедур и протоколов иммуносупрессии. Тем не менее, длительное подавление иммунитета связано со значительными побочными эффектами, а также разработка новых стратегий, способствующих толерантности остается целью современных исследований трансплантации.

Многочисленные животные модели были разработаны для фундаментальных исследований в области трансплантации, чтобы изучить механизмы отторжения трансплантата и испытать иммуносупрессии подходы для предотвращения отторжения трансплантата и для содействия долгосрочному толерантности 1-3. Мышиные модели стали основой иммунологического исследований в связи с исключительной и обширной доступности диагностических и терапевтических антител и четко определенных инбредных и трансгенных линий. Пересадка кожи является простая процедура, которая не требует специальных навыков микрохирургических и можетлегко контролировать в послеоперационном периоде. Взятые вместе, трансплантация кожи мыши была исключительным инструментом для изучения многих аспектов , участвующих в реакции аллоиммунная, включая доставку антигена, незаконный оборот клеток и разрушения тканей во время отторжения трансплантата 4,5.

Здесь мы покажем процедуру шаг за шагом для полной толщины пересадки кожи с использованием модели мыши, и мы опишем важные шаги, необходимые для успешного приживления пересаженного кожи.

Protocol

Все процедуры были проведены в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных Национального института здоровья (NIH) и были одобрены Университета животных по уходу и использованию комитета Джона Хопкинса (JHUACUC) путем. Конкретные процедуры были выполнены в с?…

Representative Results

Размещение повязкой на мыши-реципиента является важным шагом процедуры. Кожный трансплантат позиционируется на стволе получателя, между плеча, бедра и позвоночника (рисунок 1). Бандаж выполнен со сложенным марлю и сочетание двух пластиковых пластырей. Мышь п…

Discussion

С момента своего появления по Medawar, во- первых , в исследованиях на людях , а затем у кроликов и мышей, трансплантация кожи была бесценным моделью для изучения аллогенных иммунных ответов 6,7. В этой рукописи, мы представляем модель крупномасштабного, не кровоснабжением, полную толщи…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа финансировалась грантом NIH R01AI077610.

Materials

Straight micro forceps  Sigma F4017
Curved micro forceps  Aesculap BD333R
Curved Stevens tenotomy scissors  Aesculap BC905R
Mayo dissecting  scissors Sigma S3146
Micro needle holder Aesculap BM563R
Sterile gauze Covidien 441218
6-0 Nylon suture  MWI 31849
Plastic Strips Band-Aid Johnson & Johnson Obtained from pharmacy
10 cm Petri dish Fisherbrand FB0875712
PBS Quality Biological 119069131
Buprenorphine DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy
Enrofloxacin Bayer Health Care 186599

References

  1. Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. , (2016).
  2. Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. , (2016).
  3. Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , e50753 (2014).
  4. Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
  5. Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
  6. Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
  7. Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
  8. Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. , (2008).
  9. Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. , e51724 (2014).
  10. Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
  11. Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
  12. Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
  13. Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
  14. McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
  15. Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
  16. Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
  17. Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).

Play Video

Cite This Article
Cheng, C., Lee, C., Fryer, M., Furtmüller, G. J., Oh, B., Powell, J. D., Brandacher, G. Murine Full-thickness Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (119), e55105, doi:10.3791/55105 (2017).

View Video