Murine Transplantation de peau pleine épaisseur
Summary
Murine transplantation pleine épaisseur peau est un modèle bien établi pour étudier le rejet dans un cadre de allo. Ici, nous vous proposons un tutoriel de chaque étape impliquée dans la réalisation d'une / c BALB -> C57BL / 6 de pleine épaisseur greffe de peau.
Abstract
Murine transplantation pleine épaisseur peau est un modèle in vivo bien établi pour étudier la réponse allo et le rejet de greffe. En dépit de son application limitée à l'homme, la transplantation de la peau chez la souris a été largement utilisé pour la recherche sur la transplantation. La procédure est facile à apprendre et à exécuter, et il ne nécessite pas de techniques de microchirurgie délicates, ni une formation approfondie. De plus, le rejet de greffe dans ce modèle se produit dans une réaction immunologique très reproductible et est aisément contrôlée par inspection directe et palpation. En outre, la transplantation de la peau secondaire avec des greffes de donneurs appariés ou de la peau par des tiers peut être effectuée sur des modèles plus complexes de transplantation comme une méthode alternative et simple pour évaluer la tolérance spécifique du donneur. Les complications sont faibles et sont en général limités à une surdose d'anesthésie ou de détresse respiratoire après la procédure. échec de la greffe, d'autre part, se produit fréquemment par suite d'une mauvaise préparation du grà l'arrière, un mauvais positionnement dans le lit de greffe, ou un emplacement inapproprié de la bande. Dans cet article, nous présentons un protocole de pleine épaisseur transplantation de la peau chez la souris et de décrire les étapes importantes nécessaires à une procédure réussie.
Introduction
La transplantation d'organes est le traitement de choix pour les patients souffrant d'insuffisance d'organes en phase terminale, et les résultats se sont améliorés remarquablement avec les progrès des interventions chirurgicales et des protocoles d'immunosuppression. Cependant, immunosuppression à long terme est associée à des effets secondaires importants, et le développement de nouvelles stratégies qui promeuvent la tolérance demeure l'objectif de la recherche en transplantation moderne.
De nombreux modèles animaux ont été développés pour la recherche fondamentale en transplantation, pour étudier les mécanismes de rejet d'allogreffe et de tester immunosuppression approches pour prévenir le rejet de greffe et pour la promotion de la tolérance à long terme 1-3. Des modèles de souris sont devenus le pilier de la recherche immunologique due à la disponibilité exclusive et vaste d'anticorps diagnostiques et thérapeutiques et les souches consanguines et transgéniques bien définies. la transplantation de la peau est une procédure simple qui ne nécessite pas de compétences particulières de microchirurgie et peutêtre facilement contrôlé postopératoires. Pris ensemble, la transplantation de la peau de la souris a été un outil exceptionnel pour étudier de nombreux aspects impliqués dans la réponse allo, y compris la livraison de l' antigène, le trafic cellulaire, et la destruction des tissus pendant le rejet de greffe 4,5.
Ici, nous montrons la procédure étape par étape pour la transplantation de la peau de pleine épaisseur en utilisant le modèle de la souris, et nous décrivons les étapes importantes nécessaires pour une prise de greffe réussie de la peau transplantée.
Protocol
Representative Results
Discussion
Depuis son introduction par Medawar, d' abord dans des études humaines, puis chez les lapins et les souris, la transplantation de la peau a été un modèle précieux pour l'étude des réponses immunitaires allogéniques 6,7. Dans ce manuscrit, nous présentons un modèle de grande échelle, non-vascularisées, la transplantation de peau totale en utilisant la peau supérieure et inférieure du dos. Diverses méthodes alternatives, y compris en utilisant la peau de la queue ou la peau de l' orei…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été financé par le NIH subvention R01AI077610.
Materials
| Straight micro forceps | Sigma | F4017 | |
| Curved micro forceps | Aesculap | BD333R | |
| Curved Stevens tenotomy scissors | Aesculap | BC905R | |
| Mayo dissecting scissors | Sigma | S3146 | |
| Micro needle holder | Aesculap | BM563R | |
| Sterile gauze | Covidien | 441218 | |
| 6-0 Nylon suture | MWI | 31849 | |
| Plastic Strips Band-Aid | Johnson & Johnson | Obtained from pharmacy | |
| 10 cm Petri dish | Fisherbrand | FB0875712 | |
| PBS | Quality Biological | 119069131 | |
| Buprenorphine | DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy | ||
| Enrofloxacin | Bayer Health Care | 186599 |
References
- Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. , (2016).
- Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. , (2016).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , e50753 (2014).
- Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
- Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
- Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
- Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
- Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. , (2008).
- Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. , e51724 (2014).
- Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
- Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
- Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
- Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
- McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
- Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
- Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
- Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).
