Summary

الفئران كامل سماكة الجلد زراعة

Published: January 02, 2017
doi:

Summary

الفئران كامل سمك زرع الجلد هو نموذج راسخة لدراسة الرفض في مكان منيع للمستضد الخيفي. هنا، ونحن نقدم البرنامج التعليمي كل خطوة تشارك في أداء BALB / ج -> C57BL / 6 زرع الجلد كامل سماكة.

Abstract

الفئران كامل سمك زرع الجلد هو راسخة في الجسم الحي نموذج لدراسة منيع للمستضد الخيفي الاستجابة والرفض الكسب غير المشروع. وعلى الرغم من تطبيق محدود للبشر، وزرع الجلد في الفئران وقد استخدمت على نطاق واسع للبحث الزرع. هذا الإجراء هو سهلة التعلم وأداء، وأنها لا تتطلب تقنيات المجهرية الدقيقة ولا تدريب مكثف. وعلاوة على ذلك، رفض الكسب غير المشروع في هذا النموذج يحدث في رد فعل مناعي استنساخه جدا ويتم رصد بسهولة عن طريق التفتيش المباشر والجس. وبالإضافة إلى ذلك، زرع الجلد الثانوي مع الطعوم المطابقة المانحة أو الجلد طرف ثالث يمكن أن يؤديها على المزيد من النماذج زرع معقدة كبديل وطريقة غير معقدة لتقييم التسامح المانحين محددة. مضاعفات منخفضة وهي بشكل عام تقتصر على جرعة زائدة من المخدر أو ضيق في التنفس بعد العملية. فشل الكسب غير المشروع، من ناحية أخرى، يحدث عادة نتيجة لضعف الاستعدادات للغرامفي الخلف، وتحديد المواقع غير صحيحة في السرير الكسب غير المشروع، أو وضع غير مناسب للضمادة. في هذه المقالة، نقدم بروتوكول لكامل سماكة زرع الجلد في الفئران ووصف الخطوات الهامة اللازمة لإجراء ناجحة.

Introduction

زرع الأعضاء هو الاختيار الامثل لعلاج المرضى الذين يعانون من فشل في نهاية المرحلة الجهاز، والنتائج قد تحسنت بشكل ملحوظ مع التقدم في العمليات الجراحية والبروتوكولات المناعة. ومع ذلك، ويرتبط كبت المناعة على المدى الطويل مع آثار جانبية كبيرة، ووضع استراتيجيات جديدة تعزز التسامح يبقى الهدف من البحوث زرع الحديث.

وقد وضعت نماذج حيوانية عديدة للبحوث الأساسية في زراعة الأعضاء، لدراسة آليات الرفض المزروع واختبار النهج كبت المناعة لمنع رفض الكسب غير المشروع وتعزيز التسامح على المدى الطويل 1-3. أصبحت نماذج الماوس الدعامة الأساسية لبحوث المناعة نظرا لتوافر الحصري واسعة من الأجسام المضادة التشخيصية والعلاجية واضحة المعالم السلالات الفطرية والمعدلة وراثيا. زرع الجلد هو إجراء بسيط لا يتطلب مهارات المجهرية الخاصة ويمكن رصدها بسهولة بعد العمل الجراحي. مجتمعة، كان زرع الجلد الماوس أداة استثنائية لدراسة العديد من الجوانب المعنية في الاستجابة منيع للمستضد الخيفي، بما في ذلك تقديم المستضد والاتجار الخلية، وتدمير الأنسجة أثناء الكسب غير المشروع الرفض 4،5.

هنا، نقدم لك مجموعة من الإجراء خطوة بخطوة لزرع الجلد كامل سماكة باستخدام نموذج الفأر، ونحن تصف الخطوات الهامة اللازمة لengraftment ناجحة من الجلد المزروع.

Protocol

وأجريت كافة الإجراءات وفقا لدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية من المعهد الوطني للصحة (NIH) وتمت الموافقة من قبل لجنة جامعة جونز هوبكنز رعاية الحيوان واستخدام (JHUACUC). تم تنفيذ إجراءات محددة في إطار MO13M292 بروتوكولات ACUC المعتمدة وMO13M370. <p class="jove_title" style=";text-align:right;dir…

Representative Results

وضع ضمادة على الماوس المتلقي هو خطوة هامة من هذا الإجراء. يتم وضع الكسب غير المشروع الجلد على الجذع المتلقي، بين الكتف والورك والعمود الفقري (الشكل 1). ويتكون ضمادة الشاش مع مطوية والجمع بين اثنين من ضمادات لاصقة البلاستيكية. يتم وضع الماوس ?…

Discussion

منذ مقدمته التي كتبها مدور، الأول في الدراسات الإنسانية وثم في الأرانب والفئران، وقد تم زرع الجلد نموذج لا تقدر بثمن لدراسة الاستجابات المناعية خيفي 6،7. في هذه المخطوطة، فإننا نقدم نموذجا على نطاق واسع، غير أوعية دموية، وزرع الجلد كامل سماكة باستخدام الجلد ال?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل منحة المعاهد الوطنية للصحة R01AI077610.

Materials

Straight micro forceps  Sigma F4017
Curved micro forceps  Aesculap BD333R
Curved Stevens tenotomy scissors  Aesculap BC905R
Mayo dissecting  scissors Sigma S3146
Micro needle holder Aesculap BM563R
Sterile gauze Covidien 441218
6-0 Nylon suture  MWI 31849
Plastic Strips Band-Aid Johnson & Johnson Obtained from pharmacy
10 cm Petri dish Fisherbrand FB0875712
PBS Quality Biological 119069131
Buprenorphine DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy
Enrofloxacin Bayer Health Care 186599

References

  1. Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. , (2016).
  2. Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. , (2016).
  3. Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , e50753 (2014).
  4. Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
  5. Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
  6. Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
  7. Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
  8. Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. , (2008).
  9. Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. , e51724 (2014).
  10. Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
  11. Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
  12. Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
  13. Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
  14. McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
  15. Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
  16. Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
  17. Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).

Play Video

Cite This Article
Cheng, C., Lee, C., Fryer, M., Furtmüller, G. J., Oh, B., Powell, J. D., Brandacher, G. Murine Full-thickness Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (119), e55105, doi:10.3791/55105 (2017).

View Video