השתלת עור בעובי מלא Murine
Summary
השתלת עור בעובי מלאת Murine היא מודל ומבוסס ללמוד דחייה בסביבת alloimmune. כאן, אנו מספקים הדרכה של כל שלב המעורב בביצוע BALB / ג – השתלת עור> C57BL / 6 בעובי מלא.
Abstract
השתלת עור בעובי מלאת Murine היא מודל in vivo ומבוסס ללמוד alloimmune תגובת דחיית שתל. למרות היישום המוגבל שלה לבני אדם, השתלת עור בעכברים הועסקה נרחבת למחקר השתלה. הנוהל הוא קל ללמוד ולבצע, וזה אינו דורש טכניקות מייקרו עדינות ולא הכשרה מקיפה. יתר על כן, דחיית שתל במודל זה מתרחשת תגובה אימונולוגית מאוד לשחזור מנוטר בקלות על ידי בדיקה ישירה ומישוש. בנוסף, השתלת עור משני עם שתלים בהתאמה או צד שליש עור יכולה להתבצע על מודלי השתלה מורכבים יותר כמו שיטה חלופית ולא מסובכת להעריך סובלנות תורם ספציפי. הסיבוכים נמוכים והם בכלל מוגבלים יתר הרדמה או מצוקה נשימתית לאחר ההליך. לכישלון השתל, מצד שני, בדרך כלל מתרחשת כתוצאה הכנה לקויה של גרמיצוב ומאחור, שגוי במיטת השתל, או מיקום לא ראוי של התחבושת. במאמר זה, אנו מציגים פרוטוקול להשתלת עור בעובי מלא בעכברים ולתאר הצעדים החשובים דרושי הליך מוצלח.
Introduction
השתלת איברים היא טיפול הבחירה בחולים עם כשל איברים סופנית, ותוצאות השתפרו פלאים עם ההתקדמות ניתוחים ופרוטוקולים דיכוי חיסוני. עם זאת, דיכוי מערכת חיסוני לטווח ארוך קשור לתופעות לוואי משמעותיות, לבין ההתפתחות של אסטרטגיות חדשות המקדמות סובלנות נשארת מטרת מחקר השתלה המודרנית.
במודלים של בעלי חיים רבים פותחו למחקר בסיסי בהשתלות, כדי לחקור את המנגנונים של דחייה של השתל וכדי לבחון גישות דיכוי חיסוני למניעת דחיית שתל ו לקידום סובלנות לטווח ארוך 1-3. מודלי העכבר הפכו התווך של מחקר האימונולוגי בשל הזמינויות הבלעדיות מכריעות של נוגדני אבחון וטיפול ומוגדרים היטב זנים טהורים ו מהונדסים. השתלת עור היא הליך פשוט שאינו דורש מיומנויות microsurgical מיוחדות והוא יכולבקלות להיות במעקב אחרי הניתוח. יחדיו, השתלת עור העכבר כבר כלי יוצא דופן ללמוד היבטים רבים המעורבים בתגובה alloimmune, כולל משלוח אנטיגן, סחר התא, והרס רקמות במהלך דחיית שתל 4,5.
כאן, אנו מציגים את הצעד-אחר-צעד הליך השתלת עור בעובי מלא תוך שימוש במודל העכבר, אנו מתארים את הצעדים החשובים הכרחיים עבור engraftment מוצלח של העור המושתל.
Protocol
Representative Results
Discussion
מאז השקתו ידי מךוואר, ראשון במחקרים בבני אדם ולאחר מכן בארנבות ועכברים, השתלת עור כבר מודל יסולא בפז לחקר תגובות חיסוניות אלוגנאית 6,7. בכתב היד הזה, אנו מציגים מודל של בקנה מידה גדול, הלא vascularized, השתלת עור בעובי מלא באמצעות העור הגב העליון והתחתון. שיטות חלופיות ש…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו מומנה על ידי NIH מענק R01AI077610.
Materials
| Straight micro forceps | Sigma | F4017 | |
| Curved micro forceps | Aesculap | BD333R | |
| Curved Stevens tenotomy scissors | Aesculap | BC905R | |
| Mayo dissecting scissors | Sigma | S3146 | |
| Micro needle holder | Aesculap | BM563R | |
| Sterile gauze | Covidien | 441218 | |
| 6-0 Nylon suture | MWI | 31849 | |
| Plastic Strips Band-Aid | Johnson & Johnson | Obtained from pharmacy | |
| 10 cm Petri dish | Fisherbrand | FB0875712 | |
| PBS | Quality Biological | 119069131 | |
| Buprenorphine | DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy | ||
| Enrofloxacin | Bayer Health Care | 186599 |
References
- Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. , (2016).
- Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. , (2016).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , e50753 (2014).
- Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
- Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
- Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
- Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
- Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. , (2008).
- Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. , e51724 (2014).
- Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
- Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
- Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
- Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
- McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
- Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
- Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
- Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).
