analyseren<em> In Vivo</em> Cell Migratie behulp Cell Transplantaties en Time-lapse Imaging in zebravis embryo's

In multicellulaire organismen, celmigratie van essentieel belang is voor de ontwikkeling van het embryo, waar het zorgt voor het complex van cellen in weefsels en organen, en volwassen leven, waar het deelneemt aan weefsel homeostase (bloedstolling) en immuniteit. Naast deze fysiologische functies, celmigratie is ook betrokken in verschillende pathologische situaties, waaronder met name kanker metastase.

Cel migratie is geanalyseerd in vitro voor tientallen jaren, het verstrekken van een globaal inzicht in de moleculaire mechanismen die zorgen cel bewegingen op een vlakke ondergrond. In vivo echter cellen worden geconfronteerd met een meer complexe omgeving. Er wordt duidelijk verscheen in de afgelopen jaren dat migratie in een organisme kan worden beïnvloed door externe stimuli zoals de extracellulaire matrix, buurcellen of uitgescheiden chemokinen geleiden migratie, en dat de mechanismen achter celmigratie kunnen per hetgeen beschreven <em> In vitro ^1,2. De mechanismen die zorgen voor in vivo celmigratie hebben minder aandacht gekregen tot nu toe, vooral als gevolg van de toegenomen technische moeilijkheid, vergeleken met in vitro studies. In vivo analyse van celmigratie in het bijzonder directe optische toegang tot migrerende cellen vereist, technieken om unieke cellen in labelen teneinde de dynamiek en morfologie, alsmede winst of verlies van functie te zien zal de rol van kandidaatgenen testen. Tot dusver zijn slechts enkele modelsystemen harboring deze code gebruikt te ontleden in vivo celmigratie ^3.

Onlangs hebben we gebruikten de migratie van de potentiële prechordale plaat vroege zebravisembryo's als een nieuw geschikt modelsysteem om de functie van kandidaatgenen beoordelen regelen in vivo celmigratie ^4,5. Prospectieve prechordale plaat (ook bekend als anterior mesendoderm) is een groep cellen vormen bij het begin van Gastrulation aan de rugzijde van het embryo. Tijdens gastrulatie deze groep migreert gezamenlijk de richting van het dier pool van de embryo ^6-8, aan de prechordale plaat, een mesendodermal verdikking, juist voor de notochord te vormen, en die ten grondslag liggen aan de neurale plaat. Het voorste deel van de plaat prechordale geven aanleiding tot de broedeieren klier geven, terwijl de achterste delen die bijdraagt ​​aan mesoderm ⁹ head. Dankzij de buitenlandse ontwikkeling en optische helderheid van het vis embryo, kunnen celmigratie direct en gemakkelijk worden waargenomen in deze structuur.

Celtransplantatie is een zeer krachtige techniek die zorgt voor de snelle en gemakkelijke creatie mozaïek embryo ^10. Het uiten van fluorescerende cytoskelet markers in getransplanteerde cellen resulteert in de etikettering van geïsoleerde cellen, de morfologie en de dynamiek van die gemakkelijk kan worden waargenomen. De combinatie van dit verlies of winst van de functie benadert toelaat de analyse van cel-autonome functies van een blikjedaat-gen.

De gepresenteerde protocol beschrijft hoe wij de functie van de component TORC2 sin1 geëvalueerd beheersen celmigratie actine dynamiek in vivo ^5. Maar, zoals vermeld in de resultaten en verder besproken, kan worden gebruikt om de mogelijke betrokkenheid van elke kandidaatgen analyseren beheersen celmigratie in vivo.