Farelerde Makrofajlar tükenmesi ve Sulandırma
Summary
Makrofajlar homeostasis merkezi bir rol oynar ve birçok dokularda patoloji. Burada sunulan protokol makrofajlar tüketen için kullanılan yöntemleri açıklar<em> In vivo</em>, Kemik iliği aspirasyon gelen polarize makrofajlar doğan ve adoptively farelere makrofajlar aktarılması. Bu teknikler polarize makrofajlar sağlık ve hastalıkta oynadığı rol belirlenmesini sağlar.
Abstract
Makrofajlar doğuştan bağışıklık yanıtı başlatılması ve edinilmiş bağışıklık yanıtı yönetmenlik bulaşıcı meydan okuma ya da yaralanma Doğal bağışıklık sisteminde önemli oyuncular vardır. Makrofaj disfonksiyon uygun bir bağışıklık yanıtı monte bir yetersizlik yol açabilir ve bu şekilde, inflamatuvar barsak hastalıkları gibi birçok hastalık süreçleri, karıştığı edilmiştir. Makrofajlar, kabaca iki kategoriye ayrılır polarize fenotipleri gösterilecek. Klasik aktive makrofajlar, IFNγ veya LPS ile uyarılması ile aktive çözünürlükte alternatif aktive makrofajlar ise, IL-4 veya IL-13 tarafından aktive, süpürücü enkaz ve doku yeniden katılmak ve suçlanmıştır bakteriyel meydan okumaya yanıt olarak önemli bir role enflamasyon faz. In vivo bir inflamatuvar yanıt sırasında, makrofajlar bağışıklık hücrelerinin infiltre karmaşık bir karışımı ortasında bulunan ve ağırlaştırarak ya çözümleriniz katılabileceklerdirg iltihabı. Bir bütün hayvan modelinde yerinde makrofajların rolünü tanımlamak için, bu karmaşık ortamdan makrofajlar tüketen etkisini incelemek gerekir. In situ makrofaj fenotip rolü hakkında soru sormak için, fenotipik olarak tanımlanan kutuplaşmış makrofajların kemik iliği aspirasyon gelen, ex vivo elde edilebilir ve veya makrofajların önceden tükenmesi olmadan geri farelere ekledi. Protokolde klodronat-içeren lipozomlar Burada sunulan, karşılık PBS enjekte kontroller, dekstran, sodyum sülfat (DSS) ile endüklenen farelerde kolit esnasında kolon makrofajlar tüketen için kullanıldı. Buna ek olarak, polarize makrofajlar ex vivo olarak elde edildi ve farelere damardan enjeksiyon yoluyla aktarılmıştır. Bu yaklaşımın bir uyarı olduğunu klodronat içeren lipozomlar böylece tükenmesi tarafından gözlemlenen etkisi makrofaj özgü, sulandırılması o olduğundan emin olmak için dendritik hücreler ve makrofajlar dahil olmak üzere tüm profesyonel fagositler, tüketmek olduğunumakrofajların evlatlık transferi ile f fenotip gereklidir. Farelerde sistemik makrofaj azalması da bir CD11b-DTR arka plan üzerine backcrossing fareler elde edilebilir, ki tamamlayıcı bir yaklaşımdır. Klodronat ihtiva eden lipozom-aracılı tükenmesi avantajı backcrossing farelerin dahil süresi ve masrafı gerekmez ve bağımsız olarak farelere (C57BL / 6, BALB / c, ya da karışık arka plan ve farelerde de kullanılabilir olmasıdır ).
Protocol
Discussion
Makrofajlar, bağışıklık sisteminin önemli bir rol oynamaktadır fagositik hücrelerdir. Onlar doğuştan gelen bağışıklık yanıtı başlatılması ve edinilmiş bağışıklık yanıtı yönetmenlik sorumludur. Tipik olarak, klasik olarak aktive makrofajlar IFNγ veya LPS ile aktive ve patojenlerin ortadan kaldırılması ve bir inflamatuvar yanıt 1 montajı için sorumludurlar. Bunun tersine, alternatif olarak aktive makrofajlar, IL-4 ve IL-13 ile aktive ve inflamasyon 1 çözünürlü…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Gastroenteroloji / Kanada Sağlık Araştırma / Crohn Derneği ve Kanada New Araştırmacı Ödülü Kolit Vakfı Kanadalı Derneği tarafından desteklenen LMS için Crohn ve Kanada Kolit Vakfı bir 'Araştırma Yardım Grant' tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Clodronate-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| PBS-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| Sterile PBS pH7.4 | Invitrogen | 14190 |
| IMDM | Invitrogen | 12440 |
| Fetal Calf Serum (FCS) | Invitrogen | 12483 |
| acetic acid | BDH Aristar | BDH3092-500MLP |
| Monothioglycerol (MTG) | Sigma | 96-275 |
| Recombinant murine MCSF | Stemcell Technologies | 02951 |
| Recombinant murine GM-CSF | Stemcell Technologies | 02935 |
| Recombinant murine IL-3 | Stemcell Technologies | 02903 |
| Recombinant murine IFNγ | Stemcell Technologies | 02746 |
| Recombinant murine IL-4 | Stemcell Technologies | 02714 |
| Cell Dissociation Buffer | Invitrogen | 13150-016 |
| Rat anti-F4/80 Antibody | AbD Serotec | MCA497GA |
| Mouse anti-ArgI Antibody | BD Transduction Laboratories | 610708 |
Table 1. Specific reagents used in this protocol.
References
- Gordon, S. Alternative activation of macrophages. Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).
- Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance. Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).
- Heinsbroek, S. E., Gordon, S. The role of macrophages in inflammatory bowel diseases. Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).
- Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome. Gut. 49, 743-745 (2001).
- Maeda, S. Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis. Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).
- van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics. J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).
- Hunter, M. M. In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice. Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).
- Weisser, S. B. SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis. J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).
- Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes. J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).
- Van Rooijen, N., Sanders, A. Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications. J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).
- Smith, P. Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism. J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).
- van Rooijen, N., Hendrikx, E. Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues. Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).
- Kataoka, K. The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).
- Weisser, S. B. Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation. Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).
- Cailhier, J. F. Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation. J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).
