نضوب وإعادة إعماره الضامة في الفئران
Summary
الضامة تلعب دورا محوريا في التوازن وعلم الأمراض في العديد من الأنسجة. بروتوكول المقدمة هنا يصف أساليب لاستنزاف الضامة<em> في الجسم الحي</em>، اشتقاق الضامة الاستقطاب من aspirates نخاع العظم، ونقل adoptively الضامة في الفئران. هذه التقنيات تسمح بتحديد الدور الذي لعب الضامة الاستقطاب في الصحة والمرض.
Abstract
الضامة لاعبين حاسما في استجابة المناعة الفطرية إلى التحدي المعدية أو الإصابة، الشروع في استجابة جهاز المناعة الفطرية وتوجيه استجابة المناعة المكتسب. ويمكن أن يؤدي إلى خلل وظيفي بلعم عدم القدرة على القيام باستجابة مناسبة المناعة، وعلى هذا النحو، قد تورطت في عمليات أمراض كثيرة، من بينها امراض التهابات الامعاء. عرض الظواهر الضامة الاستقطاب التي تنقسم الى فئتين. الضامة تفعيلها كلاسيكي، تفعيلها من خلال التحفيز مع IFNγ أو LPS، تلعب دورا أساسيا في الاستجابة للتحدي البكتيرية في حين الضامة تفعيلها بدلا من ذلك، يمكنهم من IL-4 أو IL-13، والمشاركة في حطام مسح وإعادة عرض الأنسجة وقد تورطت في القرار مرحلة من التهاب. خلال استجابة التهابية في الجسم الحي، وجدت الضامة وسط خليط معقد من التسلل الى الخلايا المناعية وربما المشاركة من قبل مما أدى إلى تفاقم أو resolvinز التهاب. لتحديد دور الضامة في الموقع في نموذج حيواني كامل، من الضروري دراسة تأثير استنزاف الضامة من البيئة المعقدة. لطرح الأسئلة حول دور النمط الظاهري البلاعم في الموقع، ويمكن أن تستمد الضامة الاستقطاب تعريف ظاهريا المجراة سابقا، من aspirates نخاع العظم، وأضاف إلى الفئران، مع أو من دون استنفاد قبل الضامة. في بروتوكول المقدمة هنا clodronate المحتوية على الليبوزومات، مقابل الضوابط PBS حقن، واستخدمت في استنزاف الضامة القولون خلال كبريتات الصوديوم ديكستران (DSS) الناجم عن التهاب القولون في الفئران. وبالإضافة إلى ذلك، وقد استمدت الضامة الاستقطاب المجراة سابقا وتحويلها إلى الفئران عن طريق الحقن في الوريد. والتحذير من هذا النهج هو أن الليبوزومات clodronate المحتوية على استنزاف جميع البالعات المهنية، بما في ذلك كل الخلايا الجذعية والضامة ذلك لضمان تأثير لوحظ من قبل نضوب هو بلعم محددة، وإعادة تشكيل سالنمط الظاهري و عن طريق التحويل بالتبني الضامة هو ضروري. ويمكن أيضا النظامية نضوب البلاعم في الفئران يمكن تحقيقه من قبل الفئران backcrossing على خلفية CD11b-DTR، وهي طريقة ممتازة متكاملة. ميزة clodronate المحتوية على نضوب الحويصلية بوساطة هو أنه لا يتطلب من الوقت والنفقات المشتركة في الفئران backcrossing ويمكن استخدامه في الفئران بغض النظر عن خلفية من الفئران (C57BL / 6، BALB / ج، أو خلفية مختلطة ).
Protocol
Discussion
الضامة هي الخلايا البلعمية أن تلعب دورا هاما في الجهاز المناعي. فهي مسؤولة عن الشروع في استجابة جهاز المناعة الفطرية وتوجيه استجابة المناعة المكتسب. عادة، يتم تنشيط الضامة تفعيلها كلاسيكي بواسطة IFNγ أو LPS، وهي المسؤولة عن القضاء على مسببات الأمراض وتصاعد استجابة الت…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل 'غرانت في المعونة للبحوث' من كرون والتهاب القولون مؤسسة من كندا إلى LMS، الذي تدعمه الجمعية الكندية لأمراض الجهاز الهضمي / الجمعية الكندية لأبحاث الصحة / كرون والتهاب القولون مؤسسة جائزة كندا محقق جديد.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Clodronate-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| PBS-containing liposomes | Clodronateliposomes.org | |
| Sterile PBS pH7.4 | Invitrogen | 14190 |
| IMDM | Invitrogen | 12440 |
| Fetal Calf Serum (FCS) | Invitrogen | 12483 |
| acetic acid | BDH Aristar | BDH3092-500MLP |
| Monothioglycerol (MTG) | Sigma | 96-275 |
| Recombinant murine MCSF | Stemcell Technologies | 02951 |
| Recombinant murine GM-CSF | Stemcell Technologies | 02935 |
| Recombinant murine IL-3 | Stemcell Technologies | 02903 |
| Recombinant murine IFNγ | Stemcell Technologies | 02746 |
| Recombinant murine IL-4 | Stemcell Technologies | 02714 |
| Cell Dissociation Buffer | Invitrogen | 13150-016 |
| Rat anti-F4/80 Antibody | AbD Serotec | MCA497GA |
| Mouse anti-ArgI Antibody | BD Transduction Laboratories | 610708 |
Table 1. Specific reagents used in this protocol.
References
- Gordon, S. Alternative activation of macrophages. Nat. Rev. Immunol. 3, 23-35 (2003).
- Rescigno, M., Lopatin, U., Chieppa, M. Interactions among dendritic cells, macrophages, and epithelial cells in the gut: implications for immune tolerance. Curr. Opin. Immunol. 20, 669-675 (2008).
- Heinsbroek, S. E., Gordon, S. The role of macrophages in inflammatory bowel diseases. Expert Rev. Mol. Med. 11, e14 (2009).
- Collins, S. M., Piche, T., Rampal, P. The putative role of inflammation in the irritable bowel syndrome. Gut. 49, 743-745 (2001).
- Maeda, S. Colon cancer-derived factors activate NF-kappaB in myeloid cells via TLR2 to link inflammation and tumorigenesis. Mol. Med. Report. 4, 1083-1088 (2011).
- van Rooijen, N., van Kesteren-Hendrikx, E. Clodronate liposomes: perspectives in research and therapeutics. J. Liposome Res. 12, 81-94 (2002).
- Hunter, M. M. In vitro-derived alternatively activated macrophages reduce colonic inflammation in mice. Gastroenterology. 138, 1395-1405 (2010).
- Weisser, S. B. SHIP-deficient, alternatively activated macrophages protect mice during DSS-induced colitis. J. Leukoc. Biol. 90, 483-492 (2011).
- Qualls, J. E., Kaplan, A. M., van Rooijen, N., Cohen, D. A. Suppression of experimental colitis by intestinal mononuclear phagocytes. J. Leukoc. Biol. 80, 802-815 (2006).
- Van Rooijen, N., Sanders, A. Liposome mediated depletion of macrophages: mechanism of action, preparation of liposomes and applications. J. Immunol. Methods. 174, 83-93 (1994).
- Smith, P. Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism. J. Immunol. 178, 4557-4566 (2007).
- van Rooijen, N., Hendrikx, E. Liposomes for specific depletion of macrophages from organs and tissues. Methods Mol. Biol. 605, 189-203 (2010).
- Kataoka, K. The roles of vitreal macrophages and circulating leukocytes in retinal neovascularization. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1431-1438 (2011).
- Weisser, S. B. Alternative activation of macrophages by IL-4 requires SHIP degradation. Eur. J. Immunol. 41, 1742-1753 (2011).
- Cailhier, J. F. Conditional macrophage ablation demonstrates that resident macrophages initiate acute peritoneal inflammation. J. Immunol. 174, 2336-2342 (2005).
